Сокращения: ЛДГ ― лактатдегидрогеназа, НПВП ― нестероидные противовоспалительные препараты, ОА ― остеоартроз, ПКС ― передняя крестовидная связка, ФНО ― фактор некроза опухоли, TPLO ― tibial plateau leveling osteotomy (корригирующая остеотомия плато большеберцовой кости) ВведениеЗаболевания суставов конечностей ― наиболее часто встречающаяся группа ортопедических патологий у животных [1, 7, 8, 12]. Животные с заболеваниями суставов нуждаются в первую очередь в объективном подходе к назначению лечения для скорейшего выздоровления. Несмотря на то, что изучению диагностики и оперативного лечения собак с патологиями суставов посвящен целый ряд работ как отечественных, так и зарубежных авторов, вопросы лечения и профилактики послеоперационного артроза освещены недостаточно [3, 7, 9, 10, 14, 16].Наиболее частым послеоперационным осложнением является посттравматический ОА, характеризующийся хромотой и изменениями в структурах сустава [8, 15]. В современной отечественной и зарубежной ветеринарной литературе представлены данные о применении и эффективности НПВП и гликозаминогликанов в профилактике посттравматических осложнений, однако данные об эффективности комплексного подхода к лечению в послеоперационный период малочисленны [7, 9].Несомненный интерес представляет новый подход к лечению посттравматического артроза: предотвращение дегенерации тканей сустава, направленное на сохранение количества хондроцитов в гиалиновом хряще, а не на протекцию его матрикса. Исходя из этого, актуальной является апробация применения препарата Артрофоон (производства ООО «НПФ «Материа Медика Холдинг»), который модулирует выработку и функциональную активность эндогенного ФНОα при ОА, оказывает цитопротективное, противовоспалительное и анальгезирующее действие. За счет уменьшения продукции ряда провоспалительных цитокинов и медиаторов воспаления он препятствует прогрессированию воспалительного поражения тканей и органов-мишеней при воспалительно-дегенеративных заболеваниях суставов [2, 6].Препарат Артрофоон прошел доклинические исследования и клинические исследования у человека, зарегистрирован для медицинского применения и применяется в медицинской практике у пациентов с ортопедическими заболеваниями [4, 5, 11]. Цель исследованияОпределить эффективность применения препарата Артрофоон при лечении собак с разрывом ПКС в качестве протектора артроза коленного сустава. Задачи исследованияОценить клиническое состояние животных до и после лечения; определить рентгенографически видимые изменения в коленном суставе до и после лечения у экспериментальной и контрольной групп собак; на основании цитологического анализа синовиальной жидкости установить влияние на течение артроза препарата Артрофоон по сравнению с контрольной группой исследования. Материалы и методыИсследования проводили на кафедре ветеринарной хирургии ФГБОУ ВО «МГАВМиБ―МВА имени К.И. Скрябина» на 30 собаках массой тела более 15 кг с разрывом ПКС коленного сустава. Подбор клинических групп половозрелых собак проведен по принципу аналогов: в 1-й группе (опыт, n=15) в послеоперационном периоде при разрыве ПКС проводилась профилактика артроза коленного сустава препаратом Артрофоон (собакам крупных пород по 2 таблетки, собакам мелких и средних пород ― по 1 таблетке, 2 раза в день, 45 дней); во 2 группе (контроль, n=15) в послеоперационном периоде лечение препаратом Артрофоон не проводили. Всем животным назначили одинаковую послеоперационную терапию: энрофлоксацин, кетопрофен, глюкозамин-хондроитин комплекс в соответствующих массе тела животного дозировках.В исследованиях использовали только сертифицированные для ветеринарного применения инструменты и оборудование: рентгеновский аппарат Orange 1042, гематологический анализатор Mindray BC-2800 Vet, микроскопы и лабораторную посуду.Диагноз ставили на основании ортопедического осмотра и рентгенологических исследований. Ортопедический осмотр включал в себя определение степени и характера хромоты, а также положительный тест «выдвижного ящика» и компрессионный тест Хендерсона, на основании которых устанавливали окончательный диагноз на разрыв ПКС.Цитоморфологические исследования синовиальной жидкости у животных проводили по методу Борисова М.С., 2001 [3]. Пробы синовиальной жидкости отбирали перед проведением хирургической операции и на 45-й день терапевтического лечения из пораженного сустава в объеме не менее 0,5 мл.При ортопедическом осмотре каждого животного применена методика оценки хромоты по четырехстадийной шкале, позволяющая определить клиническую степень проявления ОА (табл. 1). Показатель хромоты определяли до лечения, на 10-е, 25-е и 45-е сутки лечения (табл. 2).1.                           Методика оценки хромоты у собак после травмы коленного сустава по клиническим признакам1.      Methods of assessing lameness in dogs after knee injury on clinical groundsФункция конечности в положении стояФункция конечности при движении шагомПальпация суставаНаличие крепитации в суставеОтсутствие опоры на конечностьКасание земли пальцамиОтсутствие опоры на конечностьКасание земли пальцами без переноса нагрузки на конечностьБолезненность при пассивных движениях в суставеБолезненность при пассивных движениях в суставе  при глубокой пальпацииКоличество баллов, начисляемое при обнаружении признака4332211 Ортопедическую степень хромоты устанавливали исходя из количества баллов, суммируя по одному показателю из четырех пунктов: первая степень ― 1…3 балла; вторая степень ― 3…6 баллов, третья степень ― 6…8 баллов; четвертая степень ― 9…10 баллов.Оперативное лечение у всех животных заключалось в выполнении TPLO по общепринятой методике [14].Рентгенологические исследования выполняли у всех животных на 1-е и 45-е сутки. В день операции выполняли рентгенографию в боковой проекции до и после операции для подтверждения правильности угла поворота плато большеберцовой кости (рис. 1). a                                                                b                                                    c Рис. 1. Рентгенографический контроль TPLO, примененный для всех животных: до операции (a), после выполнения остеотомии в прямой (b) и боковой проекциях(c)Fig. 1. X-ray control of TPLO applied to all animals: before surgery (a), after osteotomy in direct (b) and lateral projections (c) Статистическая обработка данных проводилась в программе RStudio (Version 1.1.463 – © 2009‒2018 RStudio, Inc.) с использованием пакета R версии 3.4.4. Для всех параметров рассчитаны следующие элементы описательной статистики: средние арифметические значения, медианы, квантили и пр. Нормальность распределения оценивали по тесту Шапиро-Уилка. Группы сравнивали по T-критерию Стьюдента, U-критерию Манна-Уитни, рандомизационному тесту, с помощью пуассоновской регрессии, точного критерия Фишера. Отличия от нормы рассчитывали путем сравнения границ доверительных интервалов параметров с диапазоном нормы. Различия между группами считали статистически значимыми при p<0,05. 2. Схема проведения исследований в опытной и контрольной группах2. Methods of research in the experimental and control groupsДень исследованияМанипуляции1-йПоступление животного в клинику, ортопедический осмотр, рентгенография, цитоморфология синовиальной жидкости. Проведение хирургического лечения2…9-йАмбулаторное лечение животного. Применение Артрофоона у животных опытной группы10-йПовторный прием. Ортопедический осмотр. Применение Артрофоона у животных опытной группы11…24-йАмбулаторное лечение животного. Применение Артрофоона у животных опытной группы25-йПовторный прием. Ортопедический осмотр. Применение Артрофоона у животных опытной группы26…44-йАмбулаторное лечение животного. Применение Артрофоона у животных опытной группы45-йОкончание лечения, ортопедический осмотр, рентгенография, цитоморфология синовиальной жидкости. РезультатыРезультаты ортопедических осмотров в группах представлены в таблице 3.3.      Результаты ортопедического осмотра у животных в динамикеResults of orthopedic examination in animals in dynamicsПоказательОртопедически верифицируемая степень хромоты на начало леченияСтепень хромоты, сутки от начала лечения 10-е25-е45-еОпытная группа (с применением Артрофоона)Общее количество баллов в группе3323 (- 31 %)11 (- 67 %)6 (- 82 %)MED (Q25; Q75)2 (2;3)1 (1;2)1 (0;1)*0 (0;1)*Контрольная группа (без применения Артрофоона)Общая сумма баллов3124 (- 23 %)14 (- 55 %)7 (- 77 %)MED (Q25; Q75)2 (2;2)2 (1;2)1 (0,5;1)0 (0;1)*Примечание. В скобках указано отличие от значения на начало лечения, выраженное в %.* ― статистически значимое отличие по сравнению с первым днем (р<0,05; метод пуассоновской регрессии) Из данных таблицы видно, что при применении препарата Артрофоон к 25-м суткам наблюдения происходит значительно (на 12 %) более выраженное снижение ортопедически проявляемой хромоты по сравнению с контрольной группой. На 45-е сутки разница между группами составила 5 % в пользу опытной группы. Таким образом, результаты ортопедических осмотров достоверно показывают, что применение Артрофоона в комплексной терапии послеоперационных артрозов положительно влияет на клиническое состояние животных. Попарное сравнение групп методом пуассоновской регрессии показало, что в опытной группе хромота статистически значимо снизилась уже к 25-м суткам наблюдения (р<0,05). В то время как в контрольной ― только к 45-м (р<0,05).Результаты рентгенологических исследований показывают, что у всех 30 животных в контрольной и экспериментальной группах не установлено осложнений после поворотной остеотомии плато большеберцовой кости. В опытной группе нами не выявлено значимых изменений степени ОА к 45-м суткам после операции. В контрольной группе животных, которым не был применен препарат Артрофоон, у 7 собак (46 % от общего количества в группе) наблюдали прогрессию характерных артрозных изменений в первую очередь в области проксимальной части блока бедренной кости и коленной чашки (рис. 2). Точный критерий Фишера показал, что группы имеют статистически значимые различия по доле случаев развития осложнений (p=0,006).Рис. 2. Рентгенограммы на 1-е (слева) и 45-е (справа) сутки у собаки № 4 второй группы: развитие остеоартрозных изменений, образование экзастозов на участках костной ткани, наиболее биомеханически нагруженных сухожилием четырехглавого мускула (указаны стрелками)Fig. 2. Radiographs on the 1st (left) and 45th (right) day in the dog № 4 of the second group: the development of osteoarthritis changes, the formation of examinations in areas of bone tissue, the most biomechanically loaded tendon of the muscle quadriceps (indicated by arrows) Таким образом, при рентгенографической оценке состояния коленных суставов собак установлено, что при использовании Артрофоона в комплексном лечении ОА не происходит верифицируемых изменений в структурах коленного сустава. Это дает основание утверждать, что Артрофоон предотвращает дегенерацию хряща и подлежащей субхондральной кости, в том числе в областях сухожильно-связочных анастомозов.Кроме положительных данных о применении препарата Артрофоон, выражающихся в ортопедической и рентгенографической характеристике коленных суставов, на наш взгляд, наиболее точно и информативно процессы репаративного генеза отражает динамика изменения физико-химического и цитологического состава синовиальной жидкости у собак опытной и контрольной групп (табл. 4).Так, у животных опытной группы к концу лечения статистически значимо по сравнению с первым днем снизилась степень хромоты, уменьшилось количество синовиальной жидкости, сократилось количество белка и ЛДГ, снизилось значение рН, уменьшались клеточность (в 2,7 раза) и относительное количество нейтрофилов в синовиальной жидкости (на 5,1 %). Кроме того, в 3 раза уменьшилось количество мононуклеарных клеток с вакуолизацией.В контрольной группе за время лечения статистически значимо по сравнению с первым днем снизилась степень хромоты, однако она была выше, чем в опытной группе. Уменьшилось количество синовиальной жидкости, снизилось значение рН, ЛДГ; цитоз уменьшился только в 1,7 раза, уменьшение количества нейтрофилов наблюдали только на 3,1 %. Количество мононуклеарных клеток снизилось в 2,1 раза (рис. 3 a, b).При этом по ряду показателей отмечали статистически значимые различия значений между опытной и контрольной группами на 45-е сутки эксперимента, что указывает на снижение выраженности дегенеративной артропатии в опытной группе по сравнению с контрольной. Так, по количеству синовиальной жидкости в полости сустава разница между группами составила 27,3 %. Также статистически значимой была разница по концентрации в синовиальной жидкости ЛДГ и процентному содержанию нейтрофилов. 4.      Динамика показателей синовиальной жидкости у животных с учетом степени хромотыDynamics of indicators of synovial fluid in animals, taking into account the degree of lamenessГруппа1-е сутки45-е суткиНормаПримечания1. Степень хромоты (в баллах) (MЕD)Опыт20#0# ― статистически значимое отличие от 1-го дня эксперимента (метод пуассоновской регрессии, р<0,05)Контроль21#2. Количество синовиальной жидкости, мл (M±SD)Опыт4,3±2,5(2,87; 6,71)§1,6±0,5*#(1,27; 2,04) §До 1 мл (часто до 0,5 мл)* ― статистически значимое отличие от контроля (тест Манна-Уитни, p<0,05)# ― статистически значимое отличие от 1-го дня эксперимента (тест Манна-Уитни, р<0,01)§ ― статистически значимое отличие от нормы (р<0,001); в скобках указаны значения 99,9 % доверительного интервалаКонтроль3,9±1,8(2,58; 5,25)§2,2±0,9#(1,61; 2,93) §3. Вязкость, см (M±SD)Опыт5,4±3,2(3,6; 7,1)5,2±1,2(4,5; 5,7)Высокая (муциновая нить > 5 см)§ ― статистически значимое отличие от нормы (р<0,05); в скобках указаны значения 95 % доверительного интервалаКонтроль3,8±1,8(2,8; 4,8)§4,6±1,4(3,9; 5,3)4. Белок, г/л (M±SD)Опыт31,5±6,0(28,2; 34,8)24,6±5,7#(21,4; 27,8)15…30# ― статистически значимое отличие от 1-го дня эксперимента (T-критерий Стьюдента, р<0,01)Контроль30,4±6,1(27,0; 33,8)26,7±6,2(23,3; 30,1)5. рНОпыт6,8±0,3(6,6; 6,97)§7,2±0,3#(7,0; 7,3)7,0…7,8# ― статистически значимое отличие от 1-го дня эксперимента (T-критерий Стьюдента, р<0,01)§ ― статистически статистически значимое отличие от нормы (р<0,05); в скобках указаны значения 95 % доверительного интервалаКонтроль6,8±0,3(6,6; 6,9)§7,1±0,2#(7,0; 7,2)6. Глюкоза, г/л (M±SD)Опыт4,6±1,3(3,8; 5,3)4,5±1,3(3,9; 5,0)4,3…6,7-Контроль4,9±0,9(4,4; 5,4)4,9±0,9(4,5; 5,4)7. ЛДГ, Ед/л (M±SD)Опыт410,5±254,2157,6±81,2*#Незначительное количество* ― статистически значимое отличие от контроля (T-критерий Стьюдента, р<0,01)# ― статистически значимое отличие от 1-го дня эксперимента (T-критерий Стьюдента, р<0,01)Контроль453,7±210,2272,7±132,4#8. Цитоз, клеток/мкл (M±SD)Опыт9406,7±4967,1(5589; 13225)§3483,3±1375,5#(2426; 4541)< 3000# ― статистически значимое отличие от 1-го дня эксперимента (T-критерий Стьюдента, р<0,001)§ ― стат. значимое отличие от нормы (р<0,01); в скобках указаны значения 99 % доверительного интервалаКонтроль7233,3±2555,6(5269; 9198)§4273,3±1539,7#(3090; 5457)§9. Нейтрофилы, % (M±SD)Опыт12,2±9,8(6,9; 19,3)7,1±3,3*(4,6; 9,7)до 10…12* ― статистически значимое отличие от контроля (T-критерий Стьюдента, р=0,001)§ ― статистически значимое отличие от нормы (р<0,01); в скобках указаны значения 99 % доверительного интервалаКонтроль15,2±7,7(11,2; 20,7)§12,1±4,2(8,9; 15,3)10. Крупные мононуклеарные клетки, % (M±SD)Опыт67,1±17,7(57,0; 77,0)72,2±10,4(66,0; 78,0)60…100-Контроль66,8±8,8(62,0; 72,0)71,5±7,7(67,0; 76,0)11. Малые лимфоциты, % (M±SD)Опыт20,7±16,817,1±8,00…100-Контроль18,1±6,915,7±6,212. Мононуклеарные клетки с вакуолизацией, % (M±SD)Опыт16,6±12,8(9,5; 23,7)§5,6±4,9#(3,5; 8,3)Менее 9 % клеточного состава# ― статистически значимое отличие от 1-го дня эксперимента (рандомизационный тест, р<0,01)§ ― статистически значимое отличие от нормы (р<0,05); в скобках указаны значения 95 % доверительного интервалаКонтроль10,2±5,8(7,0; 13,4)4,8±3,4#(3,2; 6,5)13. Эритроциты, % (M±SD)Опыт1,9±0,9(1,5; 2,3)1,6±0,8(1,2; 2,1)Единично-Контроль1,8±0,9(1,4; 2,3)1,5±0,7(1,2; 1,9) Таким образом, установлено, что включение препарата Артрофоон в комплексное лечение артроза позволяет статистически значимо уменьшить количество синовиальной жидкости с нормальной вязкостью, обеспечить уменьшение общей клеточности синовиальной жидкости с уменьшением общего количества нейтрофилов и вакуолизированных мононуклеарных клеток, что характеризует снижение активности дегенеративно-дистрофических реакций в суставе.ab Рис. 3. Микропрепарат. Окраска по Романовскому‒Гимзе. Об. 100, ок.10. Картина синовиальной жидкости при асептическом артрите у собаки контрольной группы: a ― до лечения: цитоз повышен, на фоне эритроцитов и эозинофильного белкового преципитата визуализируются преимущественно крупные мононуклеарные клетки, в том числе с вакуолизацией; b ― после 45 суток лечения: цитоз в норме, незначительное количество мононуклеарных клеток, без вакуолизации, незначительное количество эритроцитовFig. 3. Micropreparation. Painting by Romanovsky‒Giemsa. Х1000 Picture of synovial fluid in aseptic arthritis in dogs of the control group: a ― before treatment: the cell count is elevated, on a background of erythrocytes and eosinophilic proteinaceous precipitate visualized predominantly large mononuclear cells, including with vacuolization; b ― after 45 days of treatment: the cell count is normal, a small number of mononuclear cells without vacuolization, a small amount of red blood cells ЗаключениеВ данном исследовании была изучена эффективность Артрофоона у собак с артрозом коленного сустава и получены положительные результаты, на основании которых можно сделать вывод о его эффективности у животных и рекомендовать для клинического применения в ветеринарной медицине.В результате проведенных испытаний установлено, что Артрофоон не вызывает у собак побочных реакций в использованных дозировках, что говорит о хорошей переносимости препарата. Применение препарата Артрофоон в комплексной терапии артроза коленного сустава у собак характеризуется снижением степени хромоты к 25-м суткам (в то время как в контрольной группе ― к 45-м суткам) и, как следствие, улучшением общего состояния животного. Рентгенологические исследования показывают, что при использовании препарата Артрофоон в комплексной терапии на 45-е сутки не выявляется разрастание артрозных образований, в то время как без применения препарата в 46 % случаев регистрировалми прогрессирование ОА. На основании результатов цитологических и физико-химических исследований синовиальной жидкости установлено, что включение препарата Артрофоон в комплексное лечение артроза в целом благоприятно влияет на состав синовиальной жидкости, в которой к 45-м суткам восстанавливаются объем, вязкость, клеточность и кислотность, что, в свою очередь, благоприятно влияет на состояние гиалинового хряща сустава.Практические предложенияПри лечении собак с артрозом сустава целесообразно в комплексную терапию (применение НПВП, антибиотиков и хондропротекторов на основе гликозаминогликанов) включать препарат Артрофоон собакам крупных пород по 2 таблетки, собакам мелких и средних пород по 1 таблетке 2 раза в день в течение 45 суток. Конфликт интересовПроизводителем препарата Артрофоон, а также спонсором исследования является компания ООО «НПФ «Материка Медика Холдинг». Публикация результатов научной работы производится с согласия данной компании.