Сокращения: АлАТ ― аланинаминотрансфераза, АсАТ ― аспартатаминотрансфераза, БАК ― биохимический анализ крови, ЛДГ ― лактатдегидрогеназа, ОКА ― общеклинический анализ крови, УЗИ ― ультразвуковое исследование ВведениеБабезиоз является инвазионной трансмиссивной болезнью животных и человека, инициируемой простейшими рода Babesia [1]. В результате паразитарного поражения у собак развиваются лихорадка, гемолитическая анемия вследствие массового разрушения эритроцитов, гемоглобинурия, билирубинемия, icterus [8], нарушение окислительно-восстановительных процессов, гипоксия; идет накопление токсических продуктов, возникают острые воспалительные процессы в печени, почках, поджелудочной железе [4, 7].В этой связи возрастает актуальность такой темы исследования, как коррекция функционального состояния печени ― основного паренхиматозного органа и стабилизация гомеостаза организма при данной патологии. Цель работыИзучить эффективность препарата «Гепатоджект»® в комплексной терапии гепатита у собак. Материалы и методыРабота выполнена на базе кафедры общей патологии им. В.М. Коропова ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина и ее филиалах на производстве.Объектами исследования служили собаки обоего пола (n=140) в возрасте от 1 года до 7 лет. Диагноз «бабезиоз» ставили на основании классических клинических признаков и выявления Babesia canis в мазках крови, окрашенных по Май-Грюнвальду. Гепатит у собак на фоне острого течения спонтанного бабезиоза диагностировали на основании результатов клинических, гематологических (ОКА и БАК) исследований и ультразвукового сканирования печени на аппарате «Mindrаv Z6 Vet» (Китай).Животных разделили на три группы: 1-я контрольная ― здоровые собаки (n=35) и две опытные ― 2-я (n=48) и 3-я (n=57).Всем животным с подтвержденным бабезиозом однократно подкожно вводили препарат «Пиро-стоп®» (имидокарб) в дозе 6 мг/кг массы.Животным 2-й опытной группы, больным гепатитом, проводили базисную (патогенетическую и симптоматическую) терапию на протяжении 10 суток.Собакам 3-й опытной группы, больным гепатитом, начиная с 1-го дня опыта, на фоне 10-ти дневной базисной терапии, внутримышечно вводили раствор «Гепатоджекта»® в дозе 2,0…5,0 мл на животное.Кровь для исследования от собак получали в 1-е и 10-е сутки опыта. ОАК проводили на гематологических анализаторах «MEK 6450» (Nihon Kohden, Japan) и «Abacus Junior Vet» (Diatron, Austria). Учитывали такие показатели, как гематокрит, количество эритроцитов и содержание в них гемоглобина, количество лейкоцитов и их субпопуляций, тромбоцитов. В сыворотке крови определяли содержание АсАТ, АлАТ, ЛДГ, мочевины, глюкозы, общего и прямого билирубинов, общего белка и альбумина на автоматических биохимических анализаторах «AU 480» (BeckmanCoulter, USA), «A25» (BioSystems, Spain), «Miura 200» («ISE», Italy).Полученные данные подвергали статистической обработке с помощью программы «AnalystSoftInc.», «STATPLUS», версия 2009. Различия расценивали как достоверные при р ≤ 0,05. РезультатыВ эксперименте подтверждено, что однократное подкожное введение препарата «Пиро-стоп®» (имидокарб) собакам в дозе 6 мг/кг массы тела вызывает гибель простейших рода Babesia. При повторном исследовании мазков крови спустя 24 ч после подкожного введения препарата «Пиро-стоп®» гемопаразитов в эритроцитах не выявляли в 100 % случаях.В крови у собак, больных гепатитом, инициированным Babesia canis, в 1-й день эксперимента были выявлены: достоверное снижение общего содержания форменных элементов на 26,0 % и гипохромная анемия (р≤0,05) (табл. 1).У животных 3-й группы на фоне 10-ти дневного курса лечения с внутримышечным введением препарата «Гепатоджект»® зафиксирована нормализация гематокритного числа. У животных с базисной терапией (2-я опытная группа) гематокрит к концу опыта не достиг значения собак контрольной группы (р≤0,05).У собак 2-й опытной группы на фоне базисной терапии число эритроцитов в крови к концу эксперимента увеличилось до 5,1±0,5 х10¹²/л, но оставалось ниже значения данного показателя у контрольных животных на 30,7 % (р≤0,05). Схема лечения гепатита у собак 3-й опытной группы привела к нормализации числа эритроцитов в крови. 1.                             Изменение гематологических показателей крови у собак при гепатите, инициированном простейшими рода BabesiaChange in blood hematological parameters in dogs with hepatitis initiated by protozoa of the genus Babesia ПоказателиНормаКонтрольная группа (n=35)Данные 1 суток опыта (до лечения)(n=105)10-е стуки опытаОпытная группа № 2 (n=48)Опытная группа № 3 (n=57)Гематокрит, %38,0…55,048,5±2,1735,88±5,19*37,4±4,2*40,88±4,68Гемоглобин, г/л120…180164,0±4,21113,8±23,4*119,1±20,6*127,8±11,91*Эритроциты, х10¹²/л5,6…8,07,36±0,94,2±1,2*5,1±0,5*6,0±0,68Лейкоциты, х109/л6,0…16,09,5±1,36,2±3,326,5±2,057,3±3,01Палочкоядерные нейтрофилы, %0…3-0,9±0,3*0,3±0,1-Сегментоядерные нейтрофилы, %60…7064,2±4,679,2±6,16*72,3±8,0767,2±9,72Эозинофилы, %0…51,12±0,40,5±0,231,64±0,40,4±0,12Моноциты, %2…74,24±0,713,2±4,61*8,1±3,165,4±2,21Базофилы, %0..1----Лимфоциты, %12…3030,44±3,5715,8±5,31*14,66±9,3*24,9±7,4Тромбоциты, х109/л160…550303,8±20,779,8±20,81*203,1±31,6 */**218,2±28,3 */*** р≤0,05 ― по сравнению с контрольной группой; ** р≤0,05 ― по сравнению с 1-ми сутками опыта. У собак с гепатитом на фоне бабезиоза в крови достоверно снижалась концентрация гемоглобина на 30,6 %, по сравнению с животными контрольной группы. Введение больным животным «Гепатоджекта»® на фоне базисного лечения способствовало увеличению содержания гемоглобина в эритроцитах: к 10-м суткам опыта ― до 127,8±11,9 г/л, что выше содержания гемоглобина у собак с базисной терапией на 7,3 %.У собак с гепатитом на фоне бабезиоза в 1-е сутки опыта зафиксирован относительный лейкоцитоз: достоверно повышены количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов (р≤0,05). В 1-е сутки эксперимента в крови больных животных отмечена лимфоцитопения: число лимфоцитов было ниже, по сравнению с данными собак контрольной группы, на 92,6 % (р≤0,05).У собак 3-й опытной группы к концу опыта, в отличие от животных 2-й опытной группы, нормализовалось процентное значение содержания лейкоцитов в субпопуляциях. У животных на фоне базисной терапии сохранялось повышенное число гранулоцитов и агранулоцитов: в сравнении с контрольными животными количество сегментоядерных лейкоцитов было выше на 12,6 %, а моноцитов ― в 1,91 раза.У собак с гепатитом на фоне бабезиоза в крови снижалось число тромбоцитов в 3,8 раза (р≤0,05). Проводимый курс лечения способствовал достоверной нормализации содержания тромбоцитов у больных животных. Лечение с включением в схему «Гепатоджекта»® показало более выраженную динамику, по сравнению с базисной терапией: число тромбоцитов у собак 3-й группы было выше на 7,33 %. 2.                             Вариация показателей углеводного обмена у собак при гепатитеVariation of carbohydrate metabolism in dogs with hepatitis ПоказателиНормаКонтрольная группа (n=35)На 1-е сутки опыта (до лечения) (n=105)10-е сутки опытаОпытная группа № 2 (n=48)Опытная группа № 3 (n=57)Глюкоза, ммоль/л3,3…6,35,71±0,633,1±0,5*3,5±0,7*4,3±0,42ЛДГ, ед/л23…220146,7±30,73305,4±43,17*239,05±31,24218,8±24,03*/*** р≤0,05 ― по сравнению с контрольной группой; ** р≤0,05 ― по сравнению с 1-ми сутками опыта. Из табл. 2 видно, что у собак, больных гепатитом, в 1-й день опыта зафиксирована гипогликемия (р≤0,05). Терапия с добавлением «Гепатоджекта»® на протяжении 10-и суток способствовала выраженному повышению гликемического профиля до 4,3±0,42 ммоль/л. Разница между значениями показателя гликемии у подопытных особей 2-й и 3-й группы составляет 22,8 %.Установлено, что активность ЛДГ, катализирующего окисление L-лактата в пируват, у собак контрольной группы составило 146,7±30,73 ед/л. У животных при гепатите на фоне бабезиоза значение показателя ЛДГ в крови было достоверно повышено в 2,08 раза (р≤0,05). Лечение гепатита у собак 3-й опытной группы с применением «Гепатоджекта»® способствовало достоверной нормализации уровня ЛДГ, по сравнению с данными опытной группы № 2. 3.                             Динамика биохимических показателей крови у собак при гепатитеThe dynamics of biochemical blood parameters in dogs with hepatitis ПоказателиНормаКонтрольная группа (n=35)Данные 1 суток опыта (до лечения)  (n=105)10-е сутки опытаОпытная группа № 2 (n=48)Опытная группа № 3  (n=57)Билирубин общий, мкмоль/л<13,52,1±0,714,07±1,95*5,7±1,02*/**2,3±0,71*/**Билирубин общий, мкмоль/л<5,50,9±0,36,2±1,32*2,6±0, 48*/**2,42±0,6*/**Общий белок, г/л55…7364,2±3,1461,0±4,0860,7±5,8263,2±1,6Альбумин, г/л25…3931,9±3,927,8±0,6528,3±1,0830,4±0,35АсАТ, ед/л8…4225,41±8,7101,75±24,6*37,6±7,17**32,7±9,06**АлАТ, ед/л10…5837,3±10,1177,25±32,2*80,6±13,06*/**56,6±10,7**Мочевина, ммоль/л3,5…9,25,46±1,1615,25±2,9*8,6±1,73**7,24±1,2*** р≤0,05 – по сравнению с контрольной группой; ** р≤0,05 – по сравнению с 1-ми сутками опыта. В связи с тем, что в обмене хромопротеидов печень выполняет одну из ключевых ролей, то ее морфофункциональные изменения будут приводить к нарушениям этого обмена. Выявлено (табл. 3), что у собак, больных гепатитом на фоне бабезиоза, в 1-е сутки эксперимента в крови зафиксировано повышенное содержание общего и прямого билирубинов в 6,8 и 6,7 раза (р≤0,05), соответственно.У животных 1-й опытной группы на фоне 10-ти дневного курса базисной терапии концентрация общего билирубина в крови была достоверно ниже, по сравнению с данными первого дня эксперимента, на 146,8 %, а прямого билирубина ― на 138,4 %. Лечение гепатита на фоне бабезиоза с добавлением в терапию «Гепатоджекта»® привело к более выраженному снижению концентрации общего и прямого билирубинов, по сравнению с базисным курсом лечения. Разница между 1-й и 2-й опытными группами в содержании общего и прямого билирубинов составило 59,6 и 6,92 %, соответственно.У собак с гепатитом, инициированным Babesia canis, в сыворотке крови зафиксировано повышение активности АсАТ на 400,4 % (р≤0,05) и АлАТ ― в 4,7 раза (р≤0,05). Через 10 суток лечения с добавлением «Гепатоджекта»® зафиксирована нормализация активности АсАТ и АлАТ в крови. У животных опытной группы, не получавших «Гепатоджект»®, активность АсАТ в крови была достоверно ниже в 2,7 раза, АлАТ ― ниже на 119,9 % (р≤0,05), по сравнению с данными первого дня эксперимента.У собак с гепатитом на фоне бабезиоза концентрация мочевины в крови достоверно возросла в 2,79 раза и составила 15,25±2,9 ммоль/л. Терапия с добавлением в схему лечения «Гепатоджекта»® способствовала более выраженному снижению концентрации мочевины в крови, чем у животных 1-й опытной группы, не получавших данный препарат. Разница между значениями 2-й и 3-й опытных групп составила 15,8 %. ОбсуждениеНами установлено, что у собак при гепатите на фоне бабезиоза нарушаются углеводный и белковый обмены. Применение «Гепатоджекта»®, содержащего в своем составе L-орнитин, L-цитрулин, L-аргинин, бетаин, сорбитол и вспомогательные вещества, оказывает значительный эффект, по сравнению с базисной терапией: повышает выживаемость у особей на 13,4 %, а также способствует восстановлению гликемического профиля, понижению активности ЛДГ, АсАТ, АлАТ и концентрации мочевины.Известно, что поражение и разрушение эритроцитов простейшими Babesia canis инициирует высвобождение гемоглобина, развитие гипоксемии, гипоксии, эндогенной токсемии [10…12]. Вероятное снижение антиоксидантной активности крови, изменение метаболизма в гепатоците и усиление перекисного окисления липидов инициируют гепатоцеллюлярный некроз [2, 11, 12]. Клиническим маркером этого процесса служит увеличение активности в сыворотке крови цитозольных ферментов ― АсАТ и АлАТ, а при повреждении митохондрий ― повышение активности ЛДГ. В результате этого в гепатоцитах развиваются различные функциональные изменения: нарушаются способность печени регулировать уровень глюкозы в крови и синтез белка с последующим изменением аминокислотного состава крови; снижается процесс конъюгации билирубина с глюкуроновой кислотой; расстраиваются процессы обезвреживания аммиака и гемокоагуляции [2, 5].Метаболические гепатопротекторы ― производные аминокислот [6], входящие в состав препарата «Гепатоджект»®, не только стимулируют клеточную регенерацию, но и восстанавливают функции митохондрий и цитохромов печени, оказывают антитоксический эффект, обладают метаболическим, анаболическим и антиоксидантным действием. Полученные нами данные не противоречат результатам работ других исследователей [9]. ВыводыВключение препарата «Гепатоджект»® в схему лечения гепатита у собак, инициированного простейшими рода Babesia, позволило скорректировать у них показатели хромопротеидного обмена, снизить в крови значение таких показателей, как АсАТ и АлАТ, ЛДГ, улучшить контроль гликемии по сравнению с группой собак, получавших только препараты базисной терапии, без назначения курса гепатопротектора. Конфликт интересовПроизводителем препаратов «Гепатоджект»® и «Пиро-Стоп»® для ветеринарного применения и спонсором данного исследования является ООО «Апиценна». Решение о публикации результатов научной работы принадлежит разработчику ООО «АПИ-САН».