employee
Moskva, Russian Federation
employee
employee
Moskva, Moscow, Russian Federation
The article presents the results of the study of the efficacy of the drug «Hepatojekt»® containing L-ornithine, L-citrulin, L-arginine and auxiliary substances in the treatment of hepatitis initiated by Babesia canis in dogs. The experiment confirmed that the imidocarb-based drug («Piro-stop»®) has antiprotozoal action against the simplest genus Babesia. It has been established that the inclusion of the «Hepatojekt»® drug in the treatment regimen for dogs with hepatitis due to babesiosis, in comparison with basic therapy, contributes to a reliable correction of their carbohydrate and chromoprotein metabolism.
babesiosis, hypochromic anemia, bilirubinemia, hepatitis, hypoglycemia, «Piro-stop»®, «Hepatojeкt»®, survival
Сокращения: АлАТ ― аланинаминотрансфераза, АсАТ ― аспартатаминотрансфераза, БАК ― биохимический анализ крови, ЛДГ ― лактатдегидрогеназа, ОКА ― общеклинический анализ крови, УЗИ ― ультразвуковое исследование
Введение
Бабезиоз является инвазионной трансмиссивной болезнью животных и человека, инициируемой простейшими рода Babesia [1]. В результате паразитарного поражения у собак развиваются лихорадка, гемолитическая анемия вследствие массового разрушения эритроцитов, гемоглобинурия, билирубинемия, icterus [8], нарушение окислительно-восстановительных процессов, гипоксия; идет накопление токсических продуктов, возникают острые воспалительные процессы в печени, почках, поджелудочной железе [4, 7].
В этой связи возрастает актуальность такой темы исследования, как коррекция функционального состояния печени ― основного паренхиматозного органа и стабилизация гомеостаза организма при данной патологии.
Цель работы
Изучить эффективность препарата «Гепатоджект»® в комплексной терапии гепатита у собак.
Материалы и методы
Работа выполнена на базе кафедры общей патологии им. В.М. Коропова ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина и ее филиалах на производстве.
Объектами исследования служили собаки обоего пола (n=140) в возрасте от 1 года до 7 лет. Диагноз «бабезиоз» ставили на основании классических клинических признаков и выявления Babesia canis в мазках крови, окрашенных по Май-Грюнвальду. Гепатит у собак на фоне острого течения спонтанного бабезиоза диагностировали на основании результатов клинических, гематологических (ОКА и БАК) исследований и ультразвукового сканирования печени на аппарате «Mindrаv Z6 Vet» (Китай).
Животных разделили на три группы: 1-я контрольная ― здоровые собаки (n=35) и две опытные ― 2-я (n=48) и 3-я (n=57).
Всем животным с подтвержденным бабезиозом однократно подкожно вводили препарат «Пиро-стоп®» (имидокарб) в дозе 6 мг/кг массы.
Животным 2-й опытной группы, больным гепатитом, проводили базисную (патогенетическую и симптоматическую) терапию на протяжении 10 суток.
Собакам 3-й опытной группы, больным гепатитом, начиная с 1-го дня опыта, на фоне 10-ти дневной базисной терапии, внутримышечно вводили раствор «Гепатоджекта»® в дозе 2,0…5,0 мл на животное.
Кровь для исследования от собак получали в 1-е и 10-е сутки опыта. ОАК проводили на гематологических анализаторах «MEK 6450» (Nihon Kohden, Japan) и «Abacus Junior Vet» (Diatron, Austria). Учитывали такие показатели, как гематокрит, количество эритроцитов и содержание в них гемоглобина, количество лейкоцитов и их субпопуляций, тромбоцитов. В сыворотке крови определяли содержание АсАТ, АлАТ, ЛДГ, мочевины, глюкозы, общего и прямого билирубинов, общего белка и альбумина на автоматических биохимических анализаторах «AU 480» (BeckmanCoulter, USA), «A25» (BioSystems, Spain), «Miura 200» («ISE», Italy).
Полученные данные подвергали статистической обработке с помощью программы «AnalystSoftInc.», «STATPLUS», версия 2009. Различия расценивали как достоверные при р ≤ 0,05.
Результаты
В эксперименте подтверждено, что однократное подкожное введение препарата «Пиро-стоп®» (имидокарб) собакам в дозе 6 мг/кг массы тела вызывает гибель простейших рода Babesia. При повторном исследовании мазков крови спустя 24 ч после подкожного введения препарата «Пиро-стоп®» гемопаразитов в эритроцитах не выявляли в 100 % случаях.
В крови у собак, больных гепатитом, инициированным Babesia canis, в 1-й день эксперимента были выявлены: достоверное снижение общего содержания форменных элементов на 26,0 % и гипохромная анемия (р≤0,05) (табл. 1).
У животных 3-й группы на фоне 10-ти дневного курса лечения с внутримышечным введением препарата «Гепатоджект»® зафиксирована нормализация гематокритного числа. У животных с базисной терапией (2-я опытная группа) гематокрит к концу опыта не достиг значения собак контрольной группы (р≤0,05).
У собак 2-й опытной группы на фоне базисной терапии число эритроцитов в крови к концу эксперимента увеличилось до 5,1±0,5 х10¹²/л, но оставалось ниже значения данного показателя у контрольных животных на 30,7 % (р≤0,05). Схема лечения гепатита у собак 3-й опытной группы привела к нормализации числа эритроцитов в крови.
1. Изменение гематологических показателей крови у собак при гепатите, инициированном простейшими рода Babesia
Change in blood hematological parameters in dogs with hepatitis initiated by protozoa of the genus Babesia
|
Показатели |
Норма |
Контрольная группа (n=35) |
Данные 1 суток опыта (до лечения) (n=105) |
10-е стуки опыта |
|
|
Опытная группа № 2 (n=48) |
Опытная группа № 3 (n=57) |
||||
|
Гематокрит, % |
38,0…55,0 |
48,5±2,17 |
35,88±5,19* |
37,4±4,2* |
40,88±4,68 |
|
Гемоглобин, г/л |
120…180 |
164,0±4,21 |
113,8±23,4* |
119,1±20,6* |
127,8±11,91* |
|
Эритроциты, х10¹²/л |
5,6…8,0 |
7,36±0,9 |
4,2±1,2* |
5,1±0,5* |
6,0±0,68 |
|
Лейкоциты, х109/л |
6,0…16,0 |
9,5±1,3 |
6,2±3,32 |
6,5±2,05 |
7,3±3,01 |
|
Палочкоядерные нейтрофилы, % |
0…3 |
- |
0,9±0,3* |
0,3±0,1 |
- |
|
Сегментоядерные нейтрофилы, % |
60…70 |
64,2±4,6 |
79,2±6,16* |
72,3±8,07 |
67,2±9,72 |
|
Эозинофилы, % |
0…5 |
1,12±0,4 |
0,5±0,23 |
1,64±0,4 |
0,4±0,12 |
|
Моноциты, % |
2…7 |
4,24±0,7 |
13,2±4,61* |
8,1±3,16 |
5,4±2,21 |
|
Базофилы, % |
0..1 |
- |
- |
- |
- |
|
Лимфоциты, % |
12…30 |
30,44±3,57 |
15,8±5,31* |
14,66±9,3* |
24,9±7,4 |
|
Тромбоциты, х109/л |
160…550 |
303,8±20,7 |
79,8±20,81* |
203,1±31,6 */** |
218,2±28,3 */** |
* р≤0,05 ― по сравнению с контрольной группой; ** р≤0,05 ― по сравнению с 1-ми сутками опыта.
У собак с гепатитом на фоне бабезиоза в крови достоверно снижалась концентрация гемоглобина на 30,6 %, по сравнению с животными контрольной группы. Введение больным животным «Гепатоджекта»® на фоне базисного лечения способствовало увеличению содержания гемоглобина в эритроцитах: к 10-м суткам опыта ― до 127,8±11,9 г/л, что выше содержания гемоглобина у собак с базисной терапией на 7,3 %.
У собак с гепатитом на фоне бабезиоза в 1-е сутки опыта зафиксирован относительный лейкоцитоз: достоверно повышены количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов (р≤0,05). В 1-е сутки эксперимента в крови больных животных отмечена лимфоцитопения: число лимфоцитов было ниже, по сравнению с данными собак контрольной группы, на 92,6 % (р≤0,05).
У собак 3-й опытной группы к концу опыта, в отличие от животных 2-й опытной группы, нормализовалось процентное значение содержания лейкоцитов в субпопуляциях. У животных на фоне базисной терапии сохранялось повышенное число гранулоцитов и агранулоцитов: в сравнении с контрольными животными количество сегментоядерных лейкоцитов было выше на 12,6 %, а моноцитов ― в 1,91 раза.
У собак с гепатитом на фоне бабезиоза в крови снижалось число тромбоцитов в 3,8 раза (р≤0,05). Проводимый курс лечения способствовал достоверной нормализации содержания тромбоцитов у больных животных. Лечение с включением в схему «Гепатоджекта»® показало более выраженную динамику, по сравнению с базисной терапией: число тромбоцитов у собак 3-й группы было выше на 7,33 %.
2. Вариация показателей углеводного обмена у собак при гепатите
Variation of carbohydrate metabolism in dogs with hepatitis
|
Показатели |
Норма |
Контрольная группа (n=35) |
На 1-е сутки опыта (до лечения) (n=105) |
10-е сутки опыта |
|
|
Опытная группа № 2 (n=48) |
Опытная группа № 3 (n=57) |
||||
|
Глюкоза, ммоль/л |
3,3…6,3 |
5,71±0,63 |
3,1±0,5* |
3,5±0,7* |
4,3±0,42 |
|
ЛДГ, ед/л |
23…220 |
146,7±30,73 |
305,4±43,17* |
239,05±31,24 |
218,8±24,03*/** |
* р≤0,05 ― по сравнению с контрольной группой; ** р≤0,05 ― по сравнению с 1-ми сутками опыта.
Из табл. 2 видно, что у собак, больных гепатитом, в 1-й день опыта зафиксирована гипогликемия (р≤0,05). Терапия с добавлением «Гепатоджекта»® на протяжении 10-и суток способствовала выраженному повышению гликемического профиля до 4,3±0,42 ммоль/л. Разница между значениями показателя гликемии у подопытных особей 2-й и 3-й группы составляет 22,8 %.
Установлено, что активность ЛДГ, катализирующего окисление L-лактата в пируват, у собак контрольной группы составило 146,7±30,73 ед/л. У животных при гепатите на фоне бабезиоза значение показателя ЛДГ в крови было достоверно повышено в 2,08 раза (р≤0,05). Лечение гепатита у собак 3-й опытной группы с применением «Гепатоджекта»® способствовало достоверной нормализации уровня ЛДГ, по сравнению с данными опытной группы № 2.
3. Динамика биохимических показателей крови у собак при гепатите
The dynamics of biochemical blood parameters in dogs with hepatitis
|
Показатели |
Норма |
Контрольная группа (n=35) |
Данные 1 суток опыта (до лечения) (n=105) |
10-е сутки опыта |
|
|
Опытная группа № 2 (n=48) |
Опытная группа № 3 (n=57) |
||||
|
Билирубин общий, мкмоль/л |
<13,5 |
2,1±0,7 |
14,07±1,95* |
5,7±1,02*/** |
2,3±0,71*/** |
|
Билирубин общий, мкмоль/л |
<5,5 |
0,9±0,3 |
6,2±1,32* |
2,6±0, 48*/** |
2,42±0,6*/** |
|
Общий белок, г/л |
55…73 |
64,2±3,14 |
61,0±4,08 |
60,7±5,82 |
63,2±1,6 |
|
Альбумин, г/л |
25…39 |
31,9±3,9 |
27,8±0,65 |
28,3±1,08 |
30,4±0,35 |
|
АсАТ, ед/л |
8…42 |
25,41±8,7 |
101,75±24,6* |
37,6±7,17** |
32,7±9,06** |
|
АлАТ, ед/л |
10…58 |
37,3±10,1 |
177,25±32,2* |
80,6±13,06*/** |
56,6±10,7** |
|
Мочевина, ммоль/л |
3,5…9,2 |
5,46±1,16 |
15,25±2,9* |
8,6±1,73** |
7,24±1,2** |
* р≤0,05 – по сравнению с контрольной группой; ** р≤0,05 – по сравнению с 1-ми сутками опыта.
В связи с тем, что в обмене хромопротеидов печень выполняет одну из ключевых ролей, то ее морфофункциональные изменения будут приводить к нарушениям этого обмена. Выявлено (табл. 3), что у собак, больных гепатитом на фоне бабезиоза, в 1-е сутки эксперимента в крови зафиксировано повышенное содержание общего и прямого билирубинов в 6,8 и 6,7 раза (р≤0,05), соответственно.
У животных 1-й опытной группы на фоне 10-ти дневного курса базисной терапии концентрация общего билирубина в крови была достоверно ниже, по сравнению с данными первого дня эксперимента, на 146,8 %, а прямого билирубина ― на 138,4 %. Лечение гепатита на фоне бабезиоза с добавлением в терапию «Гепатоджекта»® привело к более выраженному снижению концентрации общего и прямого билирубинов, по сравнению с базисным курсом лечения. Разница между 1-й и 2-й опытными группами в содержании общего и прямого билирубинов составило 59,6 и 6,92 %, соответственно.
У собак с гепатитом, инициированным Babesia canis, в сыворотке крови зафиксировано повышение активности АсАТ на 400,4 % (р≤0,05) и АлАТ ― в 4,7 раза (р≤0,05). Через 10 суток лечения с добавлением «Гепатоджекта»® зафиксирована нормализация активности АсАТ и АлАТ в крови. У животных опытной группы, не получавших «Гепатоджект»®, активность АсАТ в крови была достоверно ниже в 2,7 раза, АлАТ ― ниже на 119,9 % (р≤0,05), по сравнению с данными первого дня эксперимента.
У собак с гепатитом на фоне бабезиоза концентрация мочевины в крови достоверно возросла в 2,79 раза и составила 15,25±2,9 ммоль/л. Терапия с добавлением в схему лечения «Гепатоджекта»® способствовала более выраженному снижению концентрации мочевины в крови, чем у животных 1-й опытной группы, не получавших данный препарат. Разница между значениями 2-й и 3-й опытных групп составила 15,8 %.
Обсуждение
Нами установлено, что у собак при гепатите на фоне бабезиоза нарушаются углеводный и белковый обмены. Применение «Гепатоджекта»®, содержащего в своем составе L-орнитин, L-цитрулин, L-аргинин, бетаин, сорбитол и вспомогательные вещества, оказывает значительный эффект, по сравнению с базисной терапией: повышает выживаемость у особей на 13,4 %, а также способствует восстановлению гликемического профиля, понижению активности ЛДГ, АсАТ, АлАТ и концентрации мочевины.
Известно, что поражение и разрушение эритроцитов простейшими Babesia canis инициирует высвобождение гемоглобина, развитие гипоксемии, гипоксии, эндогенной токсемии [10…12]. Вероятное снижение антиоксидантной активности крови, изменение метаболизма в гепатоците и усиление перекисного окисления липидов инициируют гепатоцеллюлярный некроз [2, 11, 12]. Клиническим маркером этого процесса служит увеличение активности в сыворотке крови цитозольных ферментов ― АсАТ и АлАТ, а при повреждении митохондрий ― повышение активности ЛДГ. В результате этого в гепатоцитах развиваются различные функциональные изменения: нарушаются способность печени регулировать уровень глюкозы в крови и синтез белка с последующим изменением аминокислотного состава крови; снижается процесс конъюгации билирубина с глюкуроновой кислотой; расстраиваются процессы обезвреживания аммиака и гемокоагуляции [2, 5].
Метаболические гепатопротекторы ― производные аминокислот [6], входящие в состав препарата «Гепатоджект»®, не только стимулируют клеточную регенерацию, но и восстанавливают функции митохондрий и цитохромов печени, оказывают антитоксический эффект, обладают метаболическим, анаболическим и антиоксидантным действием. Полученные нами данные не противоречат результатам работ других исследователей [9].
Выводы
Включение препарата «Гепатоджект»® в схему лечения гепатита у собак, инициированного простейшими рода Babesia, позволило скорректировать у них показатели хромопротеидного обмена, снизить в крови значение таких показателей, как АсАТ и АлАТ, ЛДГ, улучшить контроль гликемии по сравнению с группой собак, получавших только препараты базисной терапии, без назначения курса гепатопротектора.
Конфликт интересов
Производителем препаратов «Гепатоджект»® и «Пиро-Стоп»® для ветеринарного применения и спонсором данного исследования является ООО «Апиценна». Решение о публикации результатов научной работы принадлежит разработчику ООО «АПИ-САН».
1. Akimov, D.Yu. Indikatornye pokazateli v laboratornoy diagnostike babezioza / D.Yu. Akimov, L.A. Shadyeva, T.M. Shlenkina // Vestnik Ul'yanovskoy gosudarstvennoy sel'skohozyaystvennoy akademii. - 2015. - №4 (32). - S. 106-111.
2. Baymatov, V.N. Reaktivnye izmeneniya v organizme zhivotnyh pri patologii / V.N. Baymatov, E.S. Volkova. - Ufa: BGAU, 2001. - 198 s.
3. Gil'dikov, D.I. Vliyanie Gepaseyfa na sobak bol'nyh gepatitom / D.I. Gil'dikov, T.V. Loseva // Voprosy normativno-pravovogo regulirovaniya v veterinarii. - 2016. - № 4. - S. 107-109.
4. Kalimanov, S.N. Gistologicheskie izmeneniya v nekotoryh parenhimatoznyh organah pri babezioze sobak / S.N. Kalimanov, V.V. Annikov, A.A. Ryadnov, O.V. Tereschenko // Izvestiya Nizhnevolzhskogo agrouniversitetskogo kompleksa: nauka i vysshee professional'noe obrazovanie. - 2015. - №1(37). - S. 1-6.
5. Loginov, A.S. Hronicheskie gepatity i cirrozy pecheni / A.S. Loginov, Yu.E. Blok. - M.: Medicina, 1987. - 269 s.
6. Nikitin, I.G. Gepatoprotektory: mify i real'nye vozmozhnosti / I.G. Nikitin // Farmateka. - 2017. - № 13. - S. 14-17.
7. Solov'eva, L.N. Lechenie sobak pri babezioze / L.N. Solov'eva // Mater. dokl. nauch. konf. «Teoriya i praktika bor'by s parazitarnymi boleznyami». Moskva, 2010. - Vyp. 11. - S. 453-457.
8. Hristianovskiy, P.I. Babezioz sobak v usloviyah sovremennogo goroda / P.I. Hristianovskiy, V.V. Belimenko // Izvestiya Orenburgskogo gosudarstvennogo universiteta. - 2008. - № 2 (18). - S. 105-106.
9. Shipulin, V.P. Puti povysheniya effektivnosti lecheniya toksicheskih gepatitov / V.P. Shipulin // Vestnik KazNMU. - 2014. - № 2 (2). - S. 39-43.
10. Conrad, P. Hemolytic anemia caused by Babesia gibsoni infection in dogs / P. Conrad, J. Thomford, I. Yamane, J. Whiting // J. Vet. Med. Assoc. - 1991. - No. 199. - pp. 601-605.
11. Jacobson, L.S. The pathophysiology of Canine babesiosis: new approaches to an old puzzle / L.S. Jacobson, I. Clark // Journal of the South African Veterinary Associations. - 1994. - No. 65. - pp. 134-145.
12. Tauken, A.N. Comparative characteristics of the protective action of drugs licorice and essential phospholipids on the organism of white rats with acute toxic hepatitis / A.N. Tauken // Herald of the KSU. - 2011. - Vol. 17. - No. 2. - pp. 24-27.
