Сокращения: БАК ― биохимический анализ крови, ДВ ― действующее вещество, К3-ЭДТА ― трикалий этилендиаминтетрауксусная кислота, МДЖ ― мелкие домашние животные, МТ ― масса тела, ОАК ― общеклинический анализ крови, УЗИ ― ультразвуковое исследование

Введение

В настоящее время наблюдается устойчивая тенденция повышения численности домашних кошек и собак в Москве, Санкт-Петербурге и других городах-миллионниках. У владельцев домашних животных сформировалась потребность в более гуманном отношении к своим питомцам, что вызывает необходимость постоянного повышения уровня грамотности в отношении кормления, содержания, ухода и ветеринарного обслуживания. В этой связи не теряет актуальности проблематика, связанная с регуляцией нежелательных проявлений полового поведения домашних плотоядных, особенно кошек [1…3, 9].

Следует отметить, что естественные циклические проявления функционирования репродуктивной системы домашних кошек создают значительные неудобства для владельца и снижают не только удовольствие от общения с питомцем, но и качество жизни членов семьи. При этом нужно учитывать, что радикальный метод хирургической кастрации кошек не гарантирует 100 % результата для подавления нежелательных проявлений половой охоты как поведенческих, так и физиологических [4] и необратимо влияет на эндокринную систему животного организма.

В настоящее время разработаны и получили достаточно широкое распространение консервативные способы управления репродуктивным поведением МДЖ, которые основаны на применении пероральных гормональных контрацептивных препаратов [1…3].

Отечественный ветеринарный рынок предлагает владельцам две группы пероральных гормональных контрацептивов, различающихся по своему качественному и количественному составу.

Препараты первой группы введены в ветеринарную практику в последней четверти прошлого века и зарегистрированы в разных странах. В качестве действующего начала они содержат один гормон (в большинстве случаев ―мегестрола ацетат, являющийся синтетическим аналогом прогестерона), поэтому их относят к моногормональным контрацептивным средствам. Серьезным недостатком этой группы препаратов является необходимость использования большой разовой и курсовой доз ДВ для подавления поведенческих проявлений половой охоты, что в долгосрочной перспективе небезопасно, так как может привести к развитию комплекса кистозной гиперплазии эндометрия и пиометры [10], фиброаденоматоза молочной железы [11…13], а также к клиническим и патологическим изменениям, типичным для сахарного диабета [14…16]. Понятно, что это ограничивает и осложняет применение моногормональных контрацептивов у кошек и собак.

Вторая группа ― бигормональные пероральные контрацептивные препараты. Они разработаны и зарегистрированы в РФ, используются в ветеринарии мелких домашних животных в течение последних 20 лет. Это гестаген-эстрогенные композиции, в которых гестаген представлен синтетическим аналогом прогестерона (эфиром мепрегенола), а эстроген ―синтетическим аналогом эстрадиола (этинилэстрадиолом). Бигормональные композиции созданы с учетом принципов, применяемых в современной медицине человека, и ориентированы на дозы гестагена и эстрогена, которые обеспечивают необходимый баланс между эффективностью, безопасностью и надлежащим контролем полового цикла. Этот подход является ключевым в разработке подобного типа препаратов, так как они должны соответствовать требованиям безопасности при долгосрочной гормональной терапии [5].

Как показала 20-летняя практика применения бигормональных контрацептивов, влияние их на организм животных в отличие от кастрации обратимо, при этом восстановление половой цикличности у МДЖ происходит в достаточно короткие сроки ― уже через 2…3 месяца после отмены препарата [8].

Недавно нами опубликованы данные всестороннего экспериментального исследования влияния более чем двухлетнего постоянного применения бигормонального препарата СЕКС БАРЬЕР^® (ООО «НПК «СКиФФ», г. Москва) на организм кошек, проводившегося в условиях клиники («БИО-ВЕТ», г. Москва), из которых с очевидностью следует, что по результатам клинической, лабораторной и инструментальной диагностики у всех получавших препарат животных в ходе всего эксперимента не было выявлено никаких отклонений от показателей физиологической нормы [6]. Есть все основания полагать, что полученный результат достигается за счет корректного сочетания в препарате гестагена с эстрогеном, что позволяет на порядки снизить дозировки гестагенного компонента (табл. 1), и при надлежащем применении бигормонального препарата избежать развития нежелательных реакций со стороны генитальной и экстрагенитальной сферы организма животного, одновременно физиологично регулируя эстральное поведение.

1.                          Сравнение курсовых доз моно- и бигормональных контрацептивных препаратов для прерывания и задержки течки у кошек

Comparison of course doses of mono- and bi-hormonal contraceptives preparation to interrupt and delay estrus in cats

Цель исследования

В данной работе представлены результаты проводившегося параллельно с исследованием на базе ветеринарной клиники [6] мониторинга длительного применения орального бигормонального контрацептивного препарата СЕКС БАРЬЕР^® для задержки и прерывания течки у кошек их владельцами в домашних условиях, где не могла быть исключена возможность тех или иных отклонений от рекомендаций, изложенных в инструкции к препарату [8].

Материалы и методы

Исследование проводилось в период с апреля 2016 по сентябрь 2018 года на кошках, содержащихся в домашних условиях, состояние которых через определенные интервалы времени контролировалось специалистами ветеринарной клиники «БИО-ВЕТ» (г. Москва) под руководством заведующей отделением лабораторной диагностики доктора ветеринарных наук Е.Е. Беловой.

Критерии включения животных в исследование. В эксперимент, по итогам отбора рекрутинговым агентством в течение апреля-мая 2016 г., включили 30 интактных кошек в возрасте от 1 до 14 лет, МТ 3,2…4,3 кг, владельцы которых проживают в г. Москве и в течение жизни животного с той или иной степенью регулярности применяют ему бигормональный контрацептивный препарат СЕКС БАРЬЕР^® капли по схемам для прерывания и задержки течки. В период проведения эксперимента животные содержались в привычных условиях, которые согласно данным, полученным в результате предварительного опроса владельцев, были разными. Кроме сведений о типе содержания (домашнее или домашне-выгульное, вид и площадь жилья, количество членов семьи) и кормления (готовые рационы, натуральный или смешанный тип кормления) уделялось внимание информации о наличии у животного тех или иных хронических заболеваний.

Распределение животных на группы. Все животные в соответствии с возрастом и МТ были разделены на три группы. Первая группа включала в себя 10 кошек в возрасте 1…5 лет, вторая группа ― 10 кошек в возрасте 5…10 лет и третья группа ― 10 кошек в возрасте 10…14 лет.

Также была сформирована контрольная группа интактных кошек (n=10) в возрасте от 2 до 5 лет, владельцы которых никогда не использовали и не используют гормональные препараты для коррекции полового поведения.

Препарат. Каждый владелец кошки опытных групп обеспечивался бигормональным контрацептивным препаратом СЕКС БАРЬЕР^® капли для кошек в необходимом количестве, определяемым инструкцией по применению. ДВ препарата являются синтетический гестаген мепрегенола ацетат водорастворимый и эстроген этинилэстрадиол, в 1 мл препарата содержится 1 мг мепрегенола ацетата водорастворимого и 0,01 мг этинилэстрадиола. По степени воздействия на организм препарат относится к малоопасным веществам (IV класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76) [7].

Схема эксперимента. Все животные перед началом эксперимента подвергались клиническому исследованию в ветеринарной клинике «БИО-ВЕТ» (г. Москва), которое включало в себя регистрацию возраста, породы, МТ, общий осмотр, оценку состояния кожи и шерстного покрова, ушных раковин, зубов и слизистой оболочки ротовой полости, термометрию, осмотр наружных половых органов, а также пальпацию молочных желез. Кроме отмеченных выше манипуляций брали кровь для ОАК и БАК; проводили УЗИ матки и яичников. Полученные данные вносили в индивидуальные регистрационные карты. Динамику концентрации прогестерона и эстрадиола не определяли из-за невозможности создать контролируемые условия содержания и кормления включенных в исследование животных.

ОАК и БАК кошек опытных и контрольной групп проводили в лаборатории ветеринарной клиники «БИО-ВЕТ». Для ОАК кровь брали из вены натощак в вакуумную пробирку с К3-ЭДТА в количестве не менее 1,0мл и исследовали на автоматическом гематологическом анализаторе «HESKA Element HT5» (США). Определяли следующие показатели: гематокрит, гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, тромбоциты.

Кровь для БАК брали из вены натощак в вакуумную пробирку с активатором свертывания в количестве не менее 1,0 мл. Сыворотку отделяли на лабораторной центрифуге «ЦЛМН-Р10-01-Элекон-М» (Россия) при 2700 мин^-1 в течение 3…5 минут и затем исследовали на автоматическом биохимическом анализаторе «Super Z» (Китай). Определяли следующие показатели: билирубины фракционно, общий белок, мочевину, креатинин, глюкозу, холестерин.

Для УЗИ матки и яичников в 3D-режиме использовали ветеринарный ультразвуковой сканер «Cymedica» (Китай) с линейным датчиком 5 МГц. В ходе исследования оценивали размеры яичников и тела матки, а также их структуру. Полученные данные были статистически обработаны с помощью программного обеспечения BioStat 3.03.

В дальнейшем, в течение всего времени исследования влияния применения владельцами в домашних условиях препарата СЕКС БАРЬЕР^® на клинический статус, морфологические и биохимические показатели крови кошек, каждые три месяца с момента включения животного в эксперимент проводили все те же диагностические мероприятия и исследования, что и перед началом эксперимента.

Кроме того, по истечении 6 месяцев эксперимента было дополнительно проведено анкетирование по вопросам, связанным с соответствием практики применения препарата за истекший период требованиям инструкции.

Результаты и обсуждение

Анамнез. Анализ результатов первичного опроса владельцев показал, что большинство (87 %) кошек, включенных в исследование, никогда не покидают место содержания, 70 % животных потребляют готовые промышленные рационы, 20 % получают смешанный тип кормления и 10 % животных находятся на натуральном кормлении. При анкетировании владельцев через 6 месяцев после начала исследования относительно соблюдения требований инструкции в отношении кратности применения и дозировки препарата были получены следующие данные:

ü    40 % владельцев, регулярно применяющих своим кошкам капли СЕКС БАРЬЕР^® для задержки течки, несколько раз нарушали интервал применения препарата (в большую сторону), в соответствии с инструкцией равный 14 дням;

ü    20 % владельцев кошек неоднократно незначительно занижали дозировку;

ü    10 % владельцев кошек опытных групп завышали дозировку препарата при его применении для прерывания начавшейся течки (табл. 2).

Уменьшения или увеличения владельцами длительности курса применения препарата в случае прерывания течки, по инструкции составляющего 3…5 дней, зафиксировано не было.

Все владельцы кошек опытных групп в период эксперимента также применяли бигормональный препарат СЕКС БАРЬЕР® по схеме для задержки течки, которая позволяет длительно поддерживать половой покой у животного. При непреднамеренном отступлении от данной схемы при начале половой охоты владельцы кошек в тот же или на следующий день вводили животным препарат по схеме для прерывания течки. В течение 3…5 дней курса применения препарата поведенческие признаки эстрального поведения у 100 % кошек полностью прекращались и через 10 дней после исчезновения признаков половой охоты владельцам рекомендовали применять препарат по схеме для задержки течки, соблюдая дозировку и кратность применения. В период применения препарата по схеме для задержки течки ни у одной кошки из опытной группы не было зарегистрировано эстрального поведения.

Животные контрольной группы в период проведения исследования спонтанно приходили в половую охоту с разной периодичностью.

2.                          Результаты анкетирования владельцев кошек опытных групп относительно соблюдения требований инструкции по кратности применения и дозированию бигормонального контрацептивного препарата СЕКС БАРЬЕР^® через 6 месяцев от начала исследования

Owner survey results regarding compliance with the requirements of the bi-hormonal contraceptive drug SEX BARRIER® instructions

Принимая во внимание возможность аналогичных нарушений в применении препарата и в дальнейшем ходе эксперимента, было принято решение контролировать соблюдение требований инструкции, для чего владельцам было предложено информировать исследователей как о наступлении течки в день ее начала, так и о намерении применить препарат по схеме для задержки течки, чтобы получить от специалиста необходимые инструкции.

Клинический осмотр. По итогам клинических осмотров и определения МТ кошек, получающих СЕКС БАРЬЕР^®, не было зарегистрировано достоверных отличий от животных контрольной группы и отклонений от референтных значений целевых показателей физиологической нормы.

Масса тела кошек при введении в исследование (апрель 2016 г.) находилась в пределах 3,2…4,3 кг. По результатам последующей ежеквартальной оценки, МТ животных в опытных и контрольных группах на каждом этапе оценки варьировалась в пределах 10…15%, как в большую, так и меньшую сторону от зарегистрированной на старте исследования (табл. 3).

3.      Динамика МТ кошек в период исследования

Dynamics of the body weight of cats during the study

УЗИ матки и яичников. Первичное УЗИ матки и яичников показало отсутствие отклонений в размерах и структуре отмеченных органов у всех животных, включенных в исследование. Данный факт указывает на отсутствие у кошек на старте исследования патологии органов репродукции.

Последующие ежеквартально проводимые УЗИ репродуктивных органов опытных и контрольной группы кошек показали нормальные размеры матки, которые значимо не изменялись до завершения исследования. УЗИ также исключило поликистоз и другие патологии яичников.

Таким образом, УЗИ матки и яичников в течение исследования не выявило негативного влияния препарата СЕКС БАРЬЕР^® на репродуктивные органы кошек в условиях его регулярного и не всегда надлежащего применения владельцами в домашних условиях.

Клинический и биохимический анализы крови. Все отслеживаемые показатели крови у кошек опытной и контрольной групп в ходе всего эксперимента  находились в пределах референтных интервалов.

Морфологические показатели. Результаты ОАК кошек опытной группы в период исследования показывают, что концентрация гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов не отличались от аналогичных показателей контрольной группы и оставались в пределах референтных значений (табл. 4, 5). Это свидетельствует о безопасности длительного применения препарата в отношении возможных неблагоприятных воздействий на морфологию крови.

Биохимические показатели. При проведении БАК в число определяемых показателей были включены билирубины как индикаторы, связанные с нарушением процессов кроветворения, функции печени и желчевыводящих путей; сывороточные аминотрансферазы как маркеры дифференциальной диагностики различных заболеваний внутренних органов; креатинин и мочевина как индикаторы почечной патологии; общий белок для оценки синтетической функции печени; глюкоза и холестерин как показатели состояния углеводного и жирового обмена, соответственно. По результатам ежеквартального исследования отмеченных показателей в течение 30 месяцев, все контролируемые биохимические маркеры у кошек опытных групп находились в пределах физиологической нормы. При этом достоверных различий между опытными и контрольными животными также не установлено (табл. 6, 7). На основании полученных данных можно сделать вывод, что длительное применение капель СЕКС БАРЬЕР^® владельцами в домашних условиях по схемам для задержки и прерывания течки, даже с учетом не всегда правильного их применения владельцами, не приводит к проявлению у животных изменений в обмене макронутриентов. Это подтверждает безопасность длительного применения препарата в отношении его влияния на метаболизм белков, жиров, углеводов и функционирование основных выделительных систем организма.

4.      Динамика показателей ОАК кошек опытных групп в период применения препарата СЕКС БАРЬЕР^® владельцами в домашних условиях

Dynamics of complete blood count of experimental cats during the use of SEX BARRIER^® by owners at home conditions

*референтный интервал ветеринарной лаборатории Лаборант-Вет

5.      Динамика показателей ОАК кошек контрольной группы

Dynamics of complete blood count of control cats

*референтный интервал ветеринарной лаборатории «Лаборант-Вет»

6.Динамика показателей БАК кошек опытной группы в период применения препарата СЕКС БАРЬЕР^® владельцами в домашних условиях

Dynamics of biochemical blood test of experimental cats during the use of SEX BARRIER^® by owners at home conditions

*референтный интервал ветеринарной лаборатории «Лаборант-Вет»

7.Динамика показателей БАК кошек контрольной группы

Dynamics of biochemical blood test of control cats

*референтный интервал ветеринарной лаборатории «Лаборант-Вет»

Заключение

Проведен мониторинг влияния длительного применения владельцами бигормонального контрацептивного препарата СЕКС БАРЬЕР^® для задержки и прерывания течки у домашних кошек, который длился более двух лет с апреля 2016 по сентябрь 2018 г.

Первичный опрос владельцев показал, что исходные данные животных в отношении типа содержания и кормления существенно различались. Кроме того, анкетирование, проводившееся по истечении 6 месяцев от начала применения препарата, показало, что за истекший период 40 % владельцев, регулярно применяющих своим кошкам капли СЕКС БАРЬЕР^® для задержки течки, иногда превышали интервал применения препарата; 20 % владельцев занижали, а 10 % владельцев кошек завышали рекомендованную инструкцией дозировку препарата при его применении для прерывания начавшейся течки. При этом всеми владельцами была подтверждена 100%-я эффективность бигормонального препарата СЕКС БАРЬЕР® как для прерывания, так и для задержки течки у кошек. На наш взгляд это связано с определенным запасом по минимальной эффективной дозе ДВ и вариабельным курсом применения препарата для прерывания течки. Это позволяет создать в течение заявленного срока необходимую для подавления поведенческих проявлений половой охоты концентрацию гормонов в органах-мишенях. Следует отметить, что супрессия эстрального поведения реализуется без отдаленного негативного влияния препарата на клинический статус, генитальную сферу, морфологию и биохимию крови кошек за счет синергизма низких доз ДВ и наличия резерва по длительности курса для прерывания половой охоты. Очевидно, в какой-то мере, сказался и тот факт, что выборка проводилась среди животных имевших в анамнезе положительный опыт применения препарата владельцами для регуляции полового поведения кошек.

Данные тезисы получили подтверждение в настоящем исследовании и ранее выполненной работе [6]. Таким образом, можно утверждать, что оральный бигормональный препарат СЕКС БАРЬЕР^® учитывает физиологические особенности эстрального цикла, половой конституции и гормонального фона кошек, позволяет максимально эффективно и безопасно, с обратимым характером действия регулировать репродуктивную функцию и является альтернативой хирургической кастрации. Оперативное удаление яичников и матки у кошек в 13 % случаев не позволяет добиться пожизненной супрессии эстрального поведения [4], данное хирургическое вмешательство имеет необратимый характер и наносит значительный ущерб эндокринной системе, что приводит к тем или иным метаболическим нарушениям, которые могут существенно снижать качество жизни животного [7].

При физикальном и инструментальном исследовании животных, проводившемся в течение более двух лет ежеквартально, было установлено, что у опытных кошек целевые показатели в течение всего срока не выходили за пределы физиологической нормы. Достоверных различий в МТ у опытных и контрольных кошек также зарегистрировано не было.