«Центр ветеринарной помощи» (Главный ветеринарный врач)
Россия
Исследованы влияние интерферона альфа собаки на развитие ранних симптомов вторичных инфекций и его эффективность как средства профилактики поздних осложнений (судорожные явления, дегидратация мякишей лап) у щенков. Материалы и методы. Выполнено рандомизированное, проспективное, контролируемое исследование нового ветеринарного лекарственного препарата интерферона альфа собаки на популяции больных парвовирозом щенков. В исследовании использовано 20 щенков собак разного пола и различных пород в возрасте 2…4 месяца, средней массой тела 7,5 кг. Использована балльная система оценки клинических симптомов. Гематологические показатели (общий и биохимический анализ крови) сравнивали в 1-й и в 9-й день опыта. Результаты. Применение интерферона альфа собаки внутримышечно сокращает сроки купирования симптомов вторичных инфекций и предотвращает развитие осложнений у больных парвовирозом собак (р = 0,003).
интерферон альфа собаки, парвовироз, вирусный энтерит собак, парвовирус щенков
Работа выполнена при поддержке Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере.
Сокращения: АлАТ ― аланинаминотрансфераза, АсАТ ― аспартатаминотрансфераза, БАК ― биохимический анализ крови, в/в ― внутривенно, в/м ― внутримышечно, ГТФ ― гуанозинтрифосфат, ДНК ― дезоксирибонуклеиновая кислота, ИФН ― интерферон, ЛДГ ― лактатдегидрогеназа, ЛП ― лекарственный препарат, ЛФ ― лейкоформула, МЕ ― международные единицы, МТ ― масса тела, нм ― нанометры, ОАК ― общий анализ крови, ПЦР ― полимеразно-цепная реакция, РНК ― рибонуклеиновая кислота, СОЭ ― скорость оседания эритроцитов, ЩФ ― щелочная фосфатаза.
Введение
Парвовирусы принадлежат к семейству Parvoviridae, подсемейству Parvovirinae, роду Parvovirus. Размеры вириона составляют 20…25 нм. Нуклеотид содержит одноцепочечную линейную, плюс-нитевую молекулу ДНК [1, 2].
Парвовирус собак довольно устойчив во внешней среде, чем объясняется его широкая распространенность. Выдерживает нагревание до 60 оС в течение 1 ч, рН 3,9…9,0. Устойчив к диэтиловому эфиру, хлороформу и пищеварительным ферментам [3]. Инактивируется гипохлоритом натрия, формалином и некоторыми другими детергентами.
Источником инфекции являются больные животные и реконвалесценты. Возможные пути передачи вируса ― через кровососущих насекомых и трансплацентарное заражение [4, 5]. Наиболее восприимчивы к вирусу щенки в возрасте до 12 месяцев [6]. Характерный гематологический диагностический признак ― панлейкопения [12, 13].
Интерферон ингибирует репликацию широкого спектра различных ДНК- и РНК-вирусов животных как в культуре клеток, так и в организме животных [7…9]. В системах клеточных культур основным этапом ингибируемого цикла репликации вирусов является синтез вирусных белков [9, 10]. Среди ИФН-индуцированных белков, участвующих в противовирусном действии ИФН в инфицированных вирусом клетках, отмечены протеинкиназа-R, 2',5'-олигоаденилатсинтетаза (OAS) и РНКаза-L, РНК-специфическая аденозиндеаминаза (ADAR) и Mx белковые ГТФазы. Двухцепочечная РНК играет центральную роль в модулировании фосфорилирования белка, деградации РНК и редактировании РНК, катализируемом индуцируемыми ИФН ферментами: киназой PKR, OAS и дезаминазой ADAR1 [11, 12].
Цель исследования
Изучить эффективность экспериментального ветеринарного ЛП (производитель ООО «Научно-Технологический Центр «БиоИнвест», Москва) как средства профилактики развития симптомов вторичных инфекций и осложнений у щенков, больных парвовирозом. Экспериментальный ЛП в качестве действующего вещества содержит интерферон собаки альфа-1 активностью 1 000 000 МЕ/мл.
Материалы и методы
Рандомизированное, контролируемое, проспективное исследование эффективности и безопасности раствора для инъекций ИФН альфа собаки при парвовирозе собак проведено в «Центре ветеринарной помощи» г. Дзержинска, являющегося филиалом кафедры «Анатомия, хирургия и внутренние незаразные болезни» ФГБОУ ВО «Нижегородская сельскохозяйственная академия».
В исследование включили 20 щенков собак разного пола и различных пород, в возрасте 2…4 месяца, средней МТ 7,5 кг, не вакцинированных, принадлежащих питомникам и охранной организации.
Критерии включения в эксперимент ― диагноз «парвовироз», установленный по совокупности клинических и лабораторных признаков; возраст пациента ― до 6 месяцев.
Критерии исключения из эксперимента ― тяжелые аллергические заболевания, патологии печени и почек, травмы.
Все животные соответствовали критериям включения и исключения.
Рандомизация выполнена однократным, бесповторным способом. Диагноз устанавливали комплексным методом, с учетом анамнеза, клинических проявлений и результатов лабораторных исследований (ПЦР, ОАК, БАК).
В процессе исследования контролировали следующие параметры: динамику симптомов, скорость выздоровления, смертность; показатели ОАК (с СОЭ и ЛФ), БАК (билирубин общий, прямой, АсАТ, АлАТ, ЩФ, ЛДГ, мочевина, креатинин, глюкоза, альфа-амилаза, общий белок, глобулины, холестерол); симптомы вторичных инфекций и осложнений в динамике.
Клиническое состояние животных и динамику симптомов, в том числе вторичных инфекций и осложнений (кроме ринита и конъюнктивита), оценивали по балльной системе, где сильная степень выраженности симптома соответствовала 3 баллам, умеренная ― 2, слабая степень ― 1 баллу, отсутствие симптома ― 0 баллов. Набор характеристик для каждого оцениваемого симптома взят из работы Foster&Smith «Determination of hydration status in dogs and cats» [14]. Система балльной оценки симптомокомплекса основного заболевания, то есть парвовирусной инфекции (выраженности конъюнктивита и ринита) представлена в таблице 1.
1. Система балльной оценки выраженности конъюнктивита и ринита
The system for assessing the severity of conjunctivitis and rhinitis in points
|
Степень выраженности конъюнктивита (ринита), баллы |
||||||
|
серозного |
гнойного |
конъюнктивит (ринит) отсутствует |
||||
|
Слабая |
Умеренная |
Сильная |
Слабая |
Умеренная |
Сильная |
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
0 |
Статистическую обработку результатов проводили с помощью непараметрических методов. Статистическую значимость различий определяли на уровне р≤0,05. Данные по безопасности оценивали по частоте выявления негативных эффектов.
Обследование пациентов включало в себя следующие этапы:
1. сбор анамнеза;
2. клинический осмотр, термометрия, аускультация сердца и легких, подсчет пульса и частоты дыханий в минуту, определение МТ;
3. ПЦР на парвовирус, аденовирус (I, II), чуму плотоядных, коронавирус собак;
4. ОАК и БАК.
Массу тела пациентов определяли на ветеринарных весах ТВ-М-300.2-А3.
Кровь у собак брали на первичном приеме из подкожной ветки v. cephalica, согласно методике, описанной Э. Рудлофф et al. [15]. Пробы крови помещали в термоконтейнер с хладагентом и доставляли в лабораторию с соблюдением температурного режима 2…8 оС. Лабораторные исследования (ОАК, БАК, ПЦР) проводили в ветеринарной лаборатории «Веттест» (г. Нижний Новгород, ул. Должанская 37а). Анализ лабораторных проб выполняли не позднее 24 ч с момента взятия крови у собаки. Для ОАК использовали анализатор «HemaScreenVet» с определением СОЭ и микроскопией мазка по стандартным методикам; для БАК ― анализатор «Super Z». ПЦР проводили на аппарате марки DTlite с использованием реактивов производства ООО «Интерлабсервис», согласно инструкциям.
Пациентов исследовали в 1-й и 9-й день эксперимента.
Животные обеих групп получали одинаковое лечение, которое включало в себя следующие средства:
Гентамицин в/в
Метронидазол в/в
Этамзилат в/м 2 р/д,
Церукал в/м 2 р/д,
Гембаланс в/м 1 раз/день
Аминокапроновая кислота в/в, 2 раза/день
Инфузионная терапия раствором Хартмана
Реамберин в/в
Димедрол в/м
Дюфалайт в/в
Лауритин-С в/м
Животные опытной группы дополнительно получали ИФН альфа собаки в/м в среднесуточной дозе 1 000 000 МЕ, 1,0 мл/10 кг МТ, 1 раз в день, 7…10 дней.
Выбор способа введения, интервала применения препарата обусловлен данными о его составе и фармакокинетике ИФН альфа собаки в организме собак [16, 17].
Результаты и обсуждение
Результаты первичного обследования животных. Инфекционный синдром включал в себя вялость, апатию, нарушение аппетита и приема воды, рвоту, диарею, кахексию, болезненность брюшной стенки и отмечался у 100 % животных. Вторичные инфекции и осложнения в 1-йдень исследования были представлены конъюнктивитом, ринитом, одышкой (табл. 2).
2. Распределение вторичных инфекций и осложнений у животных в 1-й день наблюдения
Distribution of secondary infections and complications in animals on day 1 of observation
|
Симптом |
Число животных с симптомами в группе |
|
|
опытной |
контрольной |
|
|
Конъюнктивит |
3 |
2 |
|
Ринит |
1 |
0 |
|
Одышка |
2 |
2 |
|
Судорожные явления |
0 |
0 |
|
Дегидратация мякишей лап |
0 |
0 |
|
р (показатель анализа сопряженности) |
1,0 |
|
Результаты оценки эффективности ИФН альфа собаки. За время клинического наблюдения за экспериментальными животными зарегистрированы следующие симптомы вторичных инфекций и осложнений: конъюнктивит, ринит, одышка, судорожные явления, дегидратация мякишей лап.
Выраженность конъюнктивита и ринита оценивали по балльной системе.
В таблице 1 представлены данные балльной оценки симптомов вторичных инфекций и осложнений в опытной группе.
В опытной группе из вторичных инфекций и осложнений не отмечены судороги и дегидратация мякишей лап. Динамика проявления симптомов снижалась по мере выздоровления животных от основного заболевания. Симптомы вторичных инфекций полностью исчезли на 6-е сутки эксперимента.
В таблице 3 приведены данные балльной оценки симптомов вторичных инфекций и осложнений в опытной и контрольной группах.
3. Усредненные данные балльной оценки симптомов вторичных инфекций и осложнений в опытной (О) и контрольной (К) группе.
The severity of symptoms of secondary infections and complications in the control group in points
|
Сутки |
Конъюнктивит |
Ринит |
Одышка |
Судорожные явления |
Дегидратация мякишей лап |
Сумма баллов |
||||||
|
О |
К |
О |
К |
О |
К |
О |
К |
О |
К |
О |
К |
|
|
1 |
1,33 |
1,00 |
1,00 |
0 |
3,00 |
2,00 |
0 |
0 |
0 |
0 |
5,33 |
3,00 |
|
2 |
1,33 |
1,40 |
1,00 |
0 |
2,25 |
2,60 |
0 |
0 |
0 |
0 |
4,58 |
4,00 |
|
3 |
1,33 |
1,60 |
1,50 |
1,33 |
2,75 |
1,75 |
0 |
0 |
0 |
0 |
5,58 |
4,68 |
|
4 |
2,00 |
3,40 |
1,25 |
2,50 |
2,67 |
2,00 |
0 |
0 |
0 |
0 |
5,92 |
7,90 |
|
5 |
1,67 |
2,00 |
1,33 |
2,00 |
0,50 |
2,00 |
0 |
0 |
0 |
2,00 |
3,50 |
8,00 |
|
6 |
1 |
5,00 |
0 |
2,00 |
0 |
2,00 |
0 |
0 |
0 |
1,00 |
1,00 |
10,00 |
|
7 |
0 |
4,00 |
0 |
2,00 |
0 |
1,50 |
0 |
0 |
0 |
1,00 |
0 |
8,50 |
|
8 |
0 |
4,00 |
0 |
5,00 |
0 |
1,50 |
0 |
1,00 |
0 |
1,00 |
0 |
12,50 |
|
9 |
0 |
4,00 |
0 |
5,00 |
0 |
2,00 |
0 |
1,00 |
0 |
1,00 |
0 |
13,00 |
В контрольной группе с увеличением сроков клинического наблюдения нарастает динамика вторичных инфекций и осложнений. В отличие от опытной группы, в контроле начиная с 5-х суток отмечается дегидратация мякишей лап, а с 7-х суток ― судорожные явления. Продолжительность симптомов вторичных инфекций и осложнений выходит за рамки клинического наблюдения (9 суток) и продолжается до 12 суток.
В таблице 4 и на рисунке представлены сравнительные данные динамики симптомов вторичных инфекций и осложнений больных парвовирозом собак по суткам.
4. Сравнительные данные динамики симптомов вторичных инфекций и осложнений у собак обеих групп, баллы
Comparison of symptoms of secondary infections and complications between groups
|
Группа наблюдения |
Выраженность симптомов, баллы, по суткам |
||||||||
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
|
Опыт |
5,33 |
4,58 |
5,58 |
5,92 |
3,50 |
1,00 |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
|
Контроль |
3,00 |
4,00 |
4,68 |
7,90 |
8,00 |
10,00 |
8,50 |
12,50 |
13,00 |
|
р (показатель достоверности) |
0,003 |
||||||||
Рис. Сравнительные данные динамики симптомов вторичных инфекций и осложнений у собак обеих групп
Comparison of symptoms of secondary infections and complications between groups
Выводы
Применение ИФН альфа собаки в/м сокращает сроки купирования симптомов вторичных инфекций и предотвращает развитие осложнений у больных парвовирозом собак (р = 0,003).
Применение ИФН альфа собаки в/м не вызывает побочных явлений и осложнений.
Конфликт интересов
Производителем препарата и спонсором данного исследования является ООО «Научно-Технологический Центр «БиоИнвест». Решение о публикации результатов научной работы принадлежит коллективу кафедры «Анатомия, хирургия и внутренние незаразные болезни» Нижегородской ГСХА и разработчику препарата «Научно-Технологический Центр «БиоИнвест».
1. Maxwell I.H., Terrell K.L., Maxwell F., Autonomous parvovirus vectors, Methods, 2002, No. 28 (2), pp. 168-181.
2. Tattersall P., The evolution of parvoviral taxonomy. In The Parvoviruses, ed. J.R. Kerr, M.E. Bloom, R.M. Linden et al., Hodder Arnold, London, 2006, pp. 5-14.
3. Sulimov A.A., Virusnye bolezni koshek [Virus diseases of the cats], Moscow, KolosS, 2004, 88 p. (In russ.)
4. Rahmanina M.M., Vydelenie parvovirusa sobak i izuchenie nekotoryh biologicheskih svojstv [Isolation of parvovirus of dogs and the study of some biological properties], Razrabotka metodov kontrolya biol. preparatov i diagnosticheskih sredstv [Development of the control methods of biol. preparations and the diagnostic means], Moscow, VGNKI, 1989, pp.114-121. (In russ.)
5. Goto H., Hosokawa S., Ichio S., Experimental infection of feline panleukopenia virus in specific pathogenfree cats, Jpn. J. Vet. Sci., 1983, Vol. 45, pp. 109-112.
6. Syurin V.N., Fomina N.V., Chastnaya veterinarnaya virusologiya [Particular veterinary virology], Moscow, Kolos, 1979, 472 p. (In russ.)
7. Stark G.R., Kerr I.M., Williams B.R., Silverman R.H., Schreiber R.D., How cells respond to interferons, Annu Rev Biochem.,1998, No. 67, pp. 227-264.
8. Pestka S., Langer J.A., Zoon K.C., Samuel C.E., Interferons and their actions, Annu Rev Biochem., 1987, No. 56, pp. 317-332.
9. Samuel C.E., Antiviral actions of interferon. Interferon-regulated cellular proteins and their surprisingly selective antiviral activities, Virology, 1991, No. 183, pp. 1-11.
10. Biron C.A., Sen G.C., Interferons and other cytokines. In: Knipe D.M., Howley P.M., Griffin D.E., Martin M., Roizman B., Straus S.E., editors, Fields virology, 4th ed. Philadelphia, Pa, Lippincott-Raven, 2001. pp. 321-351.
11. Mogensen K.E., Lewerenz M., Reboul J., Lutfalla G., Uzé G., The type I interferon receptor: structure, function, and evolution of a family business, J Interferon Cytokine Res.,1999, No. 19, pp. 1069-1098.
12. Woldemeskel M., Liggett A., Ilha M., Saliki J.T., Johnson L.P., Canine parvovirus-2b-associated erythema multiforme in a litter of English Setter dogs, J Vet Diagn Invest., 2011, No. 23(3), pp. 576-580.
13. Mason M.J., Gillett N.A., Muggenburg B.A., Clinical, pathological, and epidemiological aspects of canine parvoviral enteritis in an unvaccinated closed Beagle colony: 1978-1985, J Am Anim Hosp Assoc., 1987, No. 23(2), pp. 183-192, 580.
14. Foster K.R., Smith K. Determination of hydration status in dogs and cats, Aust. J. Dairy Technol., 2005, No. 60, pp. 84-92.
15. Rudloff E., Linklejter E., Tarasov A. Animal Emergency Center and Specialty Service, Vetpharma, 2011, No. 5-6, рp.72-76. (In russ.)
16. Wills R.J., Clinical pharmacokinetics of interferons, Clin. Pharmacokinet., 1990, No. 19, pp. 390-399.
17. Yamazaki H., Miyake M., Kamada N., Nishibayashi T., Mukai T., Odomi M., Ishida T., Kiwada H., Co-administration of Tacrolimus Suppresses Pharmacokinetic Modulation of Multiple Subcutaneously Administered Human Interferon-alpha in Beagle Dogs, Drug Metab. Pharmacokinet., 2010, No. 25 (2), pp. 149-154.
