Vladimir, Vladimir, Russian Federation
Moskva, Moscow, Russian Federation
A retrospective review of antimicrobial susceptibility to the fluoroquinolones and potentiated sulfonamides of 120 isolates of the most typical porcine bacterial pathogens isolated from animals of different age groups from 2009 to 2019 at FGBI «ARRIAH» was carried out. According to the results, P. multocida, H. parasuis are highly susceptible to enrofloxacin, which can be used for empirical treatment of pasteurellosis and Glasser's disease. A. pleuropneumoniae and S. suis are also susceptible to enrofloxacin, so it can be recommended for the treatment of A. pleuropneumonia and streptococcosis. 50% of isolates of S. suis isolated from the brain tissues are susceptible to the potentiated sulfonamides, so this medication can be recommended for the treatment of streptococcosis only after susceptibility testing.
infectious diseases of pigs, antibiotics, enrofloxacin, trimethoprim, sulfanilamide, Streptococcus suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis, P. multocida.
Сокращения: АБП ― антибактериальные препараты, ГЭБ ― гематоэнцефалический барьер, ДВ ― действующее вещество, КОЕ ― колониеобразующие единицы, CLSI ― Clinical and Laboratory Standards Institute (Институт клинических и лабораторных стандартов)
Введение
Динамичное развитие свиноводства в России ставит перед ветеринарной наукой ряд задач, связанных с совершенствованием средств специфической профилактики и лечения инфекционных болезней. Большое значение приобретает этиотропная терапия, и в первую очередь использование АБП, позволяющих значительно снизить ущерб, причиняемый заболеваниями бактериальной этиологии.
Цель исследования
Работа представляет собой ретроспективный обзор чувствительности изолятов возбудителей бактериальных болезней свиней, выделенных в Российской Федерации в период с 2014 по 2019 гг. в ФГБУ «ВНИИЗЖ», к следующим АБП:
ü энрофлоксацину — ДВ лекарственного препарата для ветеринарного применения под торговой маркой Энроксил®;
ü ко-тримоксазолу (потенцированный сульфаниламид) — ДВ лекарственного препарата для ветеринарного применения под торговой маркой Трисульфон®.
Данная информация необходима для разработки и применения научно-обоснованных подходов к лечению животных, сдерживанию появления и распространения антибиотикоустойчивых микробов в хозяйствах.
Материалы и методы
Проведен анализ антибиотикочувствительности 120 изолятов/штаммов возбудителей болезней свиней, из них: Pasteurella multocida ― 30; Haemophillus parasuis ― 30; Actinobacilluspleuropneumoniae ― 30 и Streptococcus suis ― 30.
Чувствительность к АБП тестировали диско-диффузионным методом по рекомендациям CLSI [1]. В работе использовали диски АБП: энрофлоксацин ― 5 мкг и ко-тримоксазол ― 25 мкг, производства НИЦФ, Санкт-Петербург.
Чувствительность изолятов/штаммов пастерелл и стрептококков к АБП определяли на питательном агаре Мюллера-Хинтон (Himedia); чувствительность изолятов гемофильных бактерий, в том числе возбудителей актинобациллезной плевропневмонии, к АБП ― на питательном агаре Мюллера-Хинтон с добавлением сыворотки крови лошади и V-фактора роста (никотинамид аденин динуклеотид). Бактериальные суспензии изолятов/штаммов готовили на фосфатно-буферном солевом растворе из суточных агаровых культур. Оптическая плотность каждого инокулюма перед использованием составляла 0,5 ед. по шкале МакФарланда, что соответствовало концентрации 1,5×108 КОЕ/см3. Посевы с дисками АБП инкубировали в течение 24 ч при температуре 37 оС. Диаметр зоны ингибирования роста культур измеряли с помощью штангенциркуля и выражали в миллиметрах. Категории чувствительности (чувствительный или резистентный), указанные в таблице 1, определяли путем сравнения зоны задержки роста каждого изолята с рекомендациями CLSI [1].
1. Интерпретация чувствительности возбудителей бактериальных заболеваний свиней к энрофлоксацину и ко-тримоксазолу диск-диффузионным методом
Interpretation of antimicrobial susceptibility of bacterial pathogens to enrofloxacin and co-trimoxazole by disk diffusion method
|
Бактерии |
|
||||
|
Энрофлоксацин |
Ко-тримоксазол |
||||
|
чувствительный |
резистентный |
чувствительный |
резистентный |
||
|
A. pleuropneumoniae |
≥21 |
≤16 |
≥16 |
≤10 |
|
|
Haemophilus parasuis |
|||||
|
Pasteurella multocida |
|||||
|
Streptococcus suis |
|||||
Для оценки воспроизводимости и точности процедуры определения чувствительности к АБП параллельно с испытуемыми изолятами в качестве эталонов использовали коллекционные штаммы. Даты исследований и характеристика изолированных от свиней штаммов, а также информация о коллекционных штаммах, представлена в табл. 2…5.
2. Перечень изолятов/штаммов Pasteurella multocida от свиней
List of Pasteurella multocida isolates/strains from pigs
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Серогруппа |
Дата выделения (получения) |
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят
|
А |
25.08.2009 |
Легкие |
125 |
|
2 |
» |
А |
13.09.2010 |
» |
65 |
|
3 |
» |
D (DNT+) |
12.03.2011 |
Носовые ходы |
75 |
|
4 |
» |
А |
12.03.2011 |
Легкие |
145 |
|
5 |
» |
D |
04.02.2013 |
н/у |
100 |
|
6 |
» |
А |
05.10.2014 |
Легкие |
95 |
|
7 |
» |
А |
05.02.2015 |
» |
60 |
|
8 |
» |
А |
11.11.2016 |
» |
70 |
|
9 |
» |
А |
02.04.2016 |
» |
120 |
|
10 |
» |
D |
30.04.2016 |
» |
65…120 |
|
11 |
» |
А |
05.06.2016 |
» |
140 |
|
12 |
» |
А |
28.06.2016 |
» |
120 |
|
13 |
» |
А |
03.03.2017 |
» |
162 |
|
14 |
» |
А |
08.03.2017 |
» |
90 |
|
15 |
» |
А |
25.03.2017 |
» |
235 |
|
16 |
» |
А |
15.04.2017 |
» |
60 |
|
17 |
» |
А |
28.05.2017 |
» |
45 |
|
18 |
» |
А |
11.06.2107 |
» |
60…80 |
|
19 |
» |
А |
24.09.2017 |
» |
57 |
|
20 |
» |
А |
24.09.2017 |
» |
160 |
|
21 |
» |
А |
16.09.2017 |
» |
46 |
|
22 |
» |
А |
21.09.207 |
» |
135…138 |
|
23 |
» |
А |
23.11.2018 |
» |
н/у |
|
24 |
» |
А |
21.11.2018 |
» |
120…150 |
|
25 |
» |
А |
29.11.2018 |
» |
н/у |
|
26 |
» |
А |
11.12.2018 |
» |
50…55 |
|
27 |
» |
А |
17.12.2018 |
» |
60…130 |
|
28 |
Штамм№1231 |
А |
- |
- |
- |
|
29 |
Штамм №9 |
D |
- |
- |
- |
|
30 |
ШтаммKobe-6 |
D |
- |
- |
- |
Примечание: н/у ― не указан
3. Перечень изолятов/штаммов Haemophillus parasuis от свиней
List of isolates/strains of Haemophilus parasuis from pigs
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Серотип |
Дата выделения (получения) |
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят
|
н/о |
13.06.2008 |
Легкие |
35 |
|
2 |
» |
н/о |
18.04.2008 |
» |
48 |
|
3 |
» |
5 |
12.05.2009 |
» |
25…35 |
|
4 |
» |
н/о |
25.08.2009 |
» |
58…65 |
|
5 |
» |
5 |
02.04.2010 |
» |
30…45 |
|
6 |
» |
4 |
09.03.2011 |
» |
68 |
|
8 |
» |
н/о |
12.10.2012 |
» |
40…60 |
|
9 |
» |
н/о |
13.08.2013 |
» |
56 |
|
10 |
» |
н/о |
15.09.2013 |
» |
38…46 |
|
11 |
» |
5 |
02.03.2014 |
» |
65 |
|
12 |
» |
н/о |
23.10.2014 |
» |
50…70 |
|
13 |
» |
н/о |
14.04.2015 |
» |
60…90 |
|
14 |
» |
н/о |
05.06.2015 |
» |
40…55 |
|
15 |
» |
н/о |
02.10.2015 |
» |
65 |
|
16 |
» |
н/о |
08.11.2015 |
» |
48…52 |
|
17 |
» |
5 |
12.03.2016 |
» |
45 |
|
18 |
» |
н/о |
25.06.2016 |
» |
35…45 |
|
19 |
» |
н/о |
03.07.2016 |
» |
60…75 |
|
20 |
» |
н/о |
11.09.2016 |
» |
50 |
|
21 |
» |
н/о |
03.02.2017 |
» |
35…55 |
|
22 |
» |
н/о |
18.04.2017 |
» |
65 |
|
23 |
» |
н/о |
22.12.2017 |
» |
30…45 |
|
24 |
» |
5 |
13.03.2018 |
Головной мозг |
40…80 |
|
25 |
» |
н/о |
06.06.2018 |
Легкие |
35 |
|
26 |
» |
5 |
11.12.2018 |
» |
50…55 |
|
27 |
Штамм Nagasaki |
5 |
18.06.2015 |
- |
- |
|
28 |
Штамм SW-124 |
4 |
18.06.2015 |
- |
- |
|
29 |
Штамм №19417 |
4 |
20.04.2014 |
- |
- |
|
30 |
Штамм «Уральский» |
5 |
- |
Легкие |
45 |
Примечание: н/о ― не определен.
4. Перечень изолятов/штаммов Actinobacillus pleuropneumoniae
List of isolates/strains of Actinobacillus pleuropneumoniae
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Серотип |
Дата выделения
|
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят |
9 |
25.08.2009 |
Легкие |
125 |
|
2 |
» |
2 |
03.10.2009 |
» |
105 |
|
3 |
» |
8 |
22.04.2009 |
» |
80 |
|
4 |
» |
10 |
18.07.2009 |
» |
75 |
|
5 |
» |
10 |
05.10.2009 |
» |
120 |
|
6 |
» |
2 |
03.04.2010 |
» |
85 |
|
7 |
» |
7 |
11.09.2010 |
» |
148 |
|
8 |
» |
8 |
12.05.2011 |
» |
112 |
|
9 |
» |
7 |
16.04.2013 |
» |
125 |
|
10 |
» |
6 |
16.04.2013 |
» |
70…90 |
|
11 |
» |
7 |
05.04.2014 |
» |
105 |
|
12 |
» |
6 |
04.11.2014 |
» |
69 |
|
13 |
» |
2 |
12.02.2015 |
» |
70…80 |
|
14 |
» |
9 |
12.03.2016 |
Селезенка |
35 |
|
15 |
» |
5 |
11.11.2016 |
Легкие |
70 |
|
16 |
» |
5 |
02.04.2016 |
» |
120 |
|
17 |
» |
5 |
15.01.2017 |
» |
140 |
|
18 |
» |
2 |
10.02.2017 |
» |
163 |
|
19 |
» |
5 |
03.03.2017 |
» |
100 |
|
20 |
» |
5 |
25.03.2017 |
» |
80…120 |
|
21 |
» |
5 |
03.03.2017 |
» |
92…127 |
|
22 |
» |
2 |
15.03.2017 |
» |
90…130 |
|
23 |
» |
2 |
07.05.2017 |
» |
100 |
|
24 |
» |
н/о |
24.04.2018 |
» |
72 |
|
25 |
» |
8 |
06.06.2018 |
» |
105 |
|
26 |
» |
5 |
21.08.2018 |
» |
110 |
|
27 |
» |
н/о |
21.11.2018 |
» |
120…150 |
|
28 |
» |
10 |
03.12.2018 |
» |
н/у |
|
29 |
» |
2 |
21.02.2019 |
» |
70…190 |
|
30 |
Штамм «Ш-1» |
2 |
03.06.2011 |
» |
110 |
|
31 |
Штамм №29089 |
2 |
18.10.2011 |
- |
- |
5. Происхождение изолятов/штаммов Streptococcus suis
Origin of isolates/strains of Streptococcus suis
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Дата выделения (получения) |
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят |
12.06.2013 |
Сустав |
60 |
|
2 |
» |
13.08.2013 |
» |
50 |
|
3 |
» |
15.03.2014 |
» |
75 |
|
4 |
» |
03.11.2014 |
» |
40…50 |
|
5 |
» |
10.02.2015 |
Селезенка |
45 |
|
6 |
» |
03.04.2015 |
» |
150 |
|
7 |
» |
20.05.2015 |
Сустав |
50 |
|
8 |
» |
21.05.2015 |
» |
110 |
|
9 |
» |
27.11.2015 |
Головной мозг |
50 |
|
10 |
» |
27.01.2016 |
Печень, селезенка |
1…2 |
|
11 |
» |
15.04.2016 |
Головной мозг |
65 |
|
12 |
» |
28.05.2016 |
Селезенка |
20 |
|
13 |
» |
18.06.2016 |
Головной мозг |
55 |
|
14 |
» |
05.08.2016 |
» |
30…35 |
|
15 |
» |
23.11.2016 |
» |
63 |
|
16 |
» |
18.02.2017 |
Селезенка |
35 |
|
17 |
» |
01.03.2017 |
Головной мозг |
60 |
|
18 |
» |
15.04.2017 |
Селезенка |
53 |
|
19 |
» |
03.05.2017 |
Сустав |
21 |
|
20 |
» |
06.05.2107 |
» |
21 |
|
21 |
» |
08.05.2107 |
Селезенка |
35 |
|
22 |
» |
09.07.2017 |
Печень, селезенка |
42 |
|
23 |
» |
02.08.2017 |
Селезенка |
5 |
|
24 |
» |
24.04.2017 |
Сустав |
50 |
|
25 |
» |
27.04.2017 |
Головной мозг |
50…60 |
|
26 |
» |
05.06.2018 |
» |
10…15 |
|
27 |
» |
03.06.2018 |
» |
34…38 |
|
28 |
» |
11.10.2018 |
» |
30…35 |
|
29 |
Штамм «КА-2» |
02.03.2015 |
» |
55» |
|
30 |
Штамм №43765 |
03.08.2016 |
- |
- |
Результаты
Результаты приведены в таблицах. Все 27 исследуемых изолятов P. multocida проявили чувствительность к энрофлоксацину (рис. 1). Из 28 изолятов A. pleuropneumoniae резистентность к энрофлоксацину выявлена у 5 (17,8 %). Из 26 изолятов H. parasuis резистентность к энрофлоксацину обнаружена у 2 (7,69 %).
Рис. 1. Чувствительность изолятов P. multocida, A. pleuropneumoniae и H. parasuis к энрофлоксацину
Fig. 1. Susceptibility of P. multocida, A. pleuropneumoniae and H. parasuis isolates to enrofloxacin
Из 28 исследуемых изолятов S. suis резистентность к энрофлоксацину проявили 4 (14,28 %) (рис. 2). В тоже время к ко-тримоксазолу резистентность обнаружена у 15 (53,7 %) изолятов. Необходимо отметить, что у 3 (10,71 %) изолятов стрептококка выявлена резистентность сразу к обоим АБП.
Рис. 2 Чувствительность изолятов Streptococcus suis к энрофлоксацину и ко-тримоксазолу
Fig. 2. Susceptibility of Streptococcus suis isolates to enrofloxacin and co-trimoxazole
Одним из частых проявлений стрептококковой инфекции поросят служит менингит, и одной из целей ретроспективного анализа была оценка чувствительности изолятов S. suis к энрофлоксацину и комбинации «триметоприм-сульфамонометоксин». Данные АБП были выбраны исходя из их фармакологических характеристик: бактерицидное действие в отношении широкого спектра микроорганизмов, быстрое всасывание в кровь и проникновение через ГЭБ.
В связи с этим отдельно оценивали чувствительность изолятов S. suis, выделенных из головного мозга свиней. Из 10 изолятов S. suis, выделенных из головного мозга свиней, резистентность к энрофлоксацину проявили 2 (20 %), а к ко-тримоксазолу ― 5 (50 %) (рис. 3).
Рис. 3 Чувствительность изолятов Streptococcus suis, выделенных из головного мозга свиней к энрофлоксацину и котримоксазолу
Fig. 3. Susceptibility of Streptococcus suis isolated from swine brain tissues to enrofloxacin and co-trimoxazole
Заключение
1. Энрофлоксацин (в частности, препараты под торговой маркой Энроксил®) можно рекомендовать для проведения эмпирической антимикробной терапии пастереллеза и гемофилезного полисерозита свиней.
2. Эффективное использование энрофлоксацина (в частности, препаратов под торговой маркой Энроксил®) для лечения актинобациллезной плевропневмонии и стрептококкоза свинейвозможно только после установления чувствительности возбудителя к данному препарату.
3. Эффективное использование сульфаниламидных препаратов (в частности, препаратов под торговой маркой Трисульфон®) для лечения менингитной, суставной и септической форм стрептококкоза свиней, возбудителем которого является Streptococcus suis, возможно только после установления чувствительности возбудителя к данному препарату.
Конфликт интересов
Компания ООО «КРКА ФАРМА» действует в интересах KRKA d. d. ― производителя лекарственных средств под торговой маркой Энроксил® (энрофлоксацин), Трисульфон® (триметоприм/сульфамонометоксин)
1. Performance standards for antimicrobial disc and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals; approved standard, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) Waine, PA, Third Ed., M31-A3, 2008, Vol. 22, No. 6.
