Владимир, Владимирская область, Россия
Москва, г. Москва и Московская область, Россия
Проведен ретроспективный обзор чувствительности к антимикробным препаратам из группы фторхинолонов и потенцированным сульфаниламидам 120 изолятов наиболее типичных возбудителей бактериальных болезней свиней, выделенных на базе ФГБУ «ВНИИЗЖ» от животных различных возрастных групп в период с 2009 по 2019 годы. Согласно полученным данным, P. multocida, H. parasuis продемонстрировали высокую чувствительность к энрофлоксацину, и его можно использовать для проведения эмпирической терапии пастереллеза и гемофилезного полисерозита. A. pleuropneumoniae и S. suis также продемонстрировали чувствительность к энрофлоксацину, поэтому он может быть рекомендован для лечения актинобациллезной плевропневмонии и стрептококкоза при наличии чувствительности. 50 % изолятов S. suis, выделенных из головного мозга свиней, продемонстрировали чувствительность, поэтому комбинированный препарат на основе триметоприма-сульфамонометоксина (Трисульфон®) можно рекомендовать для лечения стрептококкоза после установления чувствительности.
инфекционные болезни свиней, антибиотики, энрофлоксацин, триметоприм, сульфаниламид, Streptococcus suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis, P. multocida.
Сокращения: АБП ― антибактериальные препараты, ГЭБ ― гематоэнцефалический барьер, ДВ ― действующее вещество, КОЕ ― колониеобразующие единицы, CLSI ― Clinical and Laboratory Standards Institute (Институт клинических и лабораторных стандартов)
Введение
Динамичное развитие свиноводства в России ставит перед ветеринарной наукой ряд задач, связанных с совершенствованием средств специфической профилактики и лечения инфекционных болезней. Большое значение приобретает этиотропная терапия, и в первую очередь использование АБП, позволяющих значительно снизить ущерб, причиняемый заболеваниями бактериальной этиологии.
Цель исследования
Работа представляет собой ретроспективный обзор чувствительности изолятов возбудителей бактериальных болезней свиней, выделенных в Российской Федерации в период с 2014 по 2019 гг. в ФГБУ «ВНИИЗЖ», к следующим АБП:
ü энрофлоксацину — ДВ лекарственного препарата для ветеринарного применения под торговой маркой Энроксил®;
ü ко-тримоксазолу (потенцированный сульфаниламид) — ДВ лекарственного препарата для ветеринарного применения под торговой маркой Трисульфон®.
Данная информация необходима для разработки и применения научно-обоснованных подходов к лечению животных, сдерживанию появления и распространения антибиотикоустойчивых микробов в хозяйствах.
Материалы и методы
Проведен анализ антибиотикочувствительности 120 изолятов/штаммов возбудителей болезней свиней, из них: Pasteurella multocida ― 30; Haemophillus parasuis ― 30; Actinobacilluspleuropneumoniae ― 30 и Streptococcus suis ― 30.
Чувствительность к АБП тестировали диско-диффузионным методом по рекомендациям CLSI [1]. В работе использовали диски АБП: энрофлоксацин ― 5 мкг и ко-тримоксазол ― 25 мкг, производства НИЦФ, Санкт-Петербург.
Чувствительность изолятов/штаммов пастерелл и стрептококков к АБП определяли на питательном агаре Мюллера-Хинтон (Himedia); чувствительность изолятов гемофильных бактерий, в том числе возбудителей актинобациллезной плевропневмонии, к АБП ― на питательном агаре Мюллера-Хинтон с добавлением сыворотки крови лошади и V-фактора роста (никотинамид аденин динуклеотид). Бактериальные суспензии изолятов/штаммов готовили на фосфатно-буферном солевом растворе из суточных агаровых культур. Оптическая плотность каждого инокулюма перед использованием составляла 0,5 ед. по шкале МакФарланда, что соответствовало концентрации 1,5×108 КОЕ/см3. Посевы с дисками АБП инкубировали в течение 24 ч при температуре 37 оС. Диаметр зоны ингибирования роста культур измеряли с помощью штангенциркуля и выражали в миллиметрах. Категории чувствительности (чувствительный или резистентный), указанные в таблице 1, определяли путем сравнения зоны задержки роста каждого изолята с рекомендациями CLSI [1].
1. Интерпретация чувствительности возбудителей бактериальных заболеваний свиней к энрофлоксацину и ко-тримоксазолу диск-диффузионным методом
Interpretation of antimicrobial susceptibility of bacterial pathogens to enrofloxacin and co-trimoxazole by disk diffusion method
|
Бактерии |
|
||||
|
Энрофлоксацин |
Ко-тримоксазол |
||||
|
чувствительный |
резистентный |
чувствительный |
резистентный |
||
|
A. pleuropneumoniae |
≥21 |
≤16 |
≥16 |
≤10 |
|
|
Haemophilus parasuis |
|||||
|
Pasteurella multocida |
|||||
|
Streptococcus suis |
|||||
Для оценки воспроизводимости и точности процедуры определения чувствительности к АБП параллельно с испытуемыми изолятами в качестве эталонов использовали коллекционные штаммы. Даты исследований и характеристика изолированных от свиней штаммов, а также информация о коллекционных штаммах, представлена в табл. 2…5.
2. Перечень изолятов/штаммов Pasteurella multocida от свиней
List of Pasteurella multocida isolates/strains from pigs
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Серогруппа |
Дата выделения (получения) |
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят
|
А |
25.08.2009 |
Легкие |
125 |
|
2 |
» |
А |
13.09.2010 |
» |
65 |
|
3 |
» |
D (DNT+) |
12.03.2011 |
Носовые ходы |
75 |
|
4 |
» |
А |
12.03.2011 |
Легкие |
145 |
|
5 |
» |
D |
04.02.2013 |
н/у |
100 |
|
6 |
» |
А |
05.10.2014 |
Легкие |
95 |
|
7 |
» |
А |
05.02.2015 |
» |
60 |
|
8 |
» |
А |
11.11.2016 |
» |
70 |
|
9 |
» |
А |
02.04.2016 |
» |
120 |
|
10 |
» |
D |
30.04.2016 |
» |
65…120 |
|
11 |
» |
А |
05.06.2016 |
» |
140 |
|
12 |
» |
А |
28.06.2016 |
» |
120 |
|
13 |
» |
А |
03.03.2017 |
» |
162 |
|
14 |
» |
А |
08.03.2017 |
» |
90 |
|
15 |
» |
А |
25.03.2017 |
» |
235 |
|
16 |
» |
А |
15.04.2017 |
» |
60 |
|
17 |
» |
А |
28.05.2017 |
» |
45 |
|
18 |
» |
А |
11.06.2107 |
» |
60…80 |
|
19 |
» |
А |
24.09.2017 |
» |
57 |
|
20 |
» |
А |
24.09.2017 |
» |
160 |
|
21 |
» |
А |
16.09.2017 |
» |
46 |
|
22 |
» |
А |
21.09.207 |
» |
135…138 |
|
23 |
» |
А |
23.11.2018 |
» |
н/у |
|
24 |
» |
А |
21.11.2018 |
» |
120…150 |
|
25 |
» |
А |
29.11.2018 |
» |
н/у |
|
26 |
» |
А |
11.12.2018 |
» |
50…55 |
|
27 |
» |
А |
17.12.2018 |
» |
60…130 |
|
28 |
Штамм№1231 |
А |
- |
- |
- |
|
29 |
Штамм №9 |
D |
- |
- |
- |
|
30 |
ШтаммKobe-6 |
D |
- |
- |
- |
Примечание: н/у ― не указан
3. Перечень изолятов/штаммов Haemophillus parasuis от свиней
List of isolates/strains of Haemophilus parasuis from pigs
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Серотип |
Дата выделения (получения) |
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят
|
н/о |
13.06.2008 |
Легкие |
35 |
|
2 |
» |
н/о |
18.04.2008 |
» |
48 |
|
3 |
» |
5 |
12.05.2009 |
» |
25…35 |
|
4 |
» |
н/о |
25.08.2009 |
» |
58…65 |
|
5 |
» |
5 |
02.04.2010 |
» |
30…45 |
|
6 |
» |
4 |
09.03.2011 |
» |
68 |
|
8 |
» |
н/о |
12.10.2012 |
» |
40…60 |
|
9 |
» |
н/о |
13.08.2013 |
» |
56 |
|
10 |
» |
н/о |
15.09.2013 |
» |
38…46 |
|
11 |
» |
5 |
02.03.2014 |
» |
65 |
|
12 |
» |
н/о |
23.10.2014 |
» |
50…70 |
|
13 |
» |
н/о |
14.04.2015 |
» |
60…90 |
|
14 |
» |
н/о |
05.06.2015 |
» |
40…55 |
|
15 |
» |
н/о |
02.10.2015 |
» |
65 |
|
16 |
» |
н/о |
08.11.2015 |
» |
48…52 |
|
17 |
» |
5 |
12.03.2016 |
» |
45 |
|
18 |
» |
н/о |
25.06.2016 |
» |
35…45 |
|
19 |
» |
н/о |
03.07.2016 |
» |
60…75 |
|
20 |
» |
н/о |
11.09.2016 |
» |
50 |
|
21 |
» |
н/о |
03.02.2017 |
» |
35…55 |
|
22 |
» |
н/о |
18.04.2017 |
» |
65 |
|
23 |
» |
н/о |
22.12.2017 |
» |
30…45 |
|
24 |
» |
5 |
13.03.2018 |
Головной мозг |
40…80 |
|
25 |
» |
н/о |
06.06.2018 |
Легкие |
35 |
|
26 |
» |
5 |
11.12.2018 |
» |
50…55 |
|
27 |
Штамм Nagasaki |
5 |
18.06.2015 |
- |
- |
|
28 |
Штамм SW-124 |
4 |
18.06.2015 |
- |
- |
|
29 |
Штамм №19417 |
4 |
20.04.2014 |
- |
- |
|
30 |
Штамм «Уральский» |
5 |
- |
Легкие |
45 |
Примечание: н/о ― не определен.
4. Перечень изолятов/штаммов Actinobacillus pleuropneumoniae
List of isolates/strains of Actinobacillus pleuropneumoniae
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Серотип |
Дата выделения
|
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят |
9 |
25.08.2009 |
Легкие |
125 |
|
2 |
» |
2 |
03.10.2009 |
» |
105 |
|
3 |
» |
8 |
22.04.2009 |
» |
80 |
|
4 |
» |
10 |
18.07.2009 |
» |
75 |
|
5 |
» |
10 |
05.10.2009 |
» |
120 |
|
6 |
» |
2 |
03.04.2010 |
» |
85 |
|
7 |
» |
7 |
11.09.2010 |
» |
148 |
|
8 |
» |
8 |
12.05.2011 |
» |
112 |
|
9 |
» |
7 |
16.04.2013 |
» |
125 |
|
10 |
» |
6 |
16.04.2013 |
» |
70…90 |
|
11 |
» |
7 |
05.04.2014 |
» |
105 |
|
12 |
» |
6 |
04.11.2014 |
» |
69 |
|
13 |
» |
2 |
12.02.2015 |
» |
70…80 |
|
14 |
» |
9 |
12.03.2016 |
Селезенка |
35 |
|
15 |
» |
5 |
11.11.2016 |
Легкие |
70 |
|
16 |
» |
5 |
02.04.2016 |
» |
120 |
|
17 |
» |
5 |
15.01.2017 |
» |
140 |
|
18 |
» |
2 |
10.02.2017 |
» |
163 |
|
19 |
» |
5 |
03.03.2017 |
» |
100 |
|
20 |
» |
5 |
25.03.2017 |
» |
80…120 |
|
21 |
» |
5 |
03.03.2017 |
» |
92…127 |
|
22 |
» |
2 |
15.03.2017 |
» |
90…130 |
|
23 |
» |
2 |
07.05.2017 |
» |
100 |
|
24 |
» |
н/о |
24.04.2018 |
» |
72 |
|
25 |
» |
8 |
06.06.2018 |
» |
105 |
|
26 |
» |
5 |
21.08.2018 |
» |
110 |
|
27 |
» |
н/о |
21.11.2018 |
» |
120…150 |
|
28 |
» |
10 |
03.12.2018 |
» |
н/у |
|
29 |
» |
2 |
21.02.2019 |
» |
70…190 |
|
30 |
Штамм «Ш-1» |
2 |
03.06.2011 |
» |
110 |
|
31 |
Штамм №29089 |
2 |
18.10.2011 |
- |
- |
5. Происхождение изолятов/штаммов Streptococcus suis
Origin of isolates/strains of Streptococcus suis
|
№ п/п |
Изолят/штамм |
Дата выделения (получения) |
Орган выделения |
Возраст животного, сутки |
|
1 |
Изолят |
12.06.2013 |
Сустав |
60 |
|
2 |
» |
13.08.2013 |
» |
50 |
|
3 |
» |
15.03.2014 |
» |
75 |
|
4 |
» |
03.11.2014 |
» |
40…50 |
|
5 |
» |
10.02.2015 |
Селезенка |
45 |
|
6 |
» |
03.04.2015 |
» |
150 |
|
7 |
» |
20.05.2015 |
Сустав |
50 |
|
8 |
» |
21.05.2015 |
» |
110 |
|
9 |
» |
27.11.2015 |
Головной мозг |
50 |
|
10 |
» |
27.01.2016 |
Печень, селезенка |
1…2 |
|
11 |
» |
15.04.2016 |
Головной мозг |
65 |
|
12 |
» |
28.05.2016 |
Селезенка |
20 |
|
13 |
» |
18.06.2016 |
Головной мозг |
55 |
|
14 |
» |
05.08.2016 |
» |
30…35 |
|
15 |
» |
23.11.2016 |
» |
63 |
|
16 |
» |
18.02.2017 |
Селезенка |
35 |
|
17 |
» |
01.03.2017 |
Головной мозг |
60 |
|
18 |
» |
15.04.2017 |
Селезенка |
53 |
|
19 |
» |
03.05.2017 |
Сустав |
21 |
|
20 |
» |
06.05.2107 |
» |
21 |
|
21 |
» |
08.05.2107 |
Селезенка |
35 |
|
22 |
» |
09.07.2017 |
Печень, селезенка |
42 |
|
23 |
» |
02.08.2017 |
Селезенка |
5 |
|
24 |
» |
24.04.2017 |
Сустав |
50 |
|
25 |
» |
27.04.2017 |
Головной мозг |
50…60 |
|
26 |
» |
05.06.2018 |
» |
10…15 |
|
27 |
» |
03.06.2018 |
» |
34…38 |
|
28 |
» |
11.10.2018 |
» |
30…35 |
|
29 |
Штамм «КА-2» |
02.03.2015 |
» |
55» |
|
30 |
Штамм №43765 |
03.08.2016 |
- |
- |
Результаты
Результаты приведены в таблицах. Все 27 исследуемых изолятов P. multocida проявили чувствительность к энрофлоксацину (рис. 1). Из 28 изолятов A. pleuropneumoniae резистентность к энрофлоксацину выявлена у 5 (17,8 %). Из 26 изолятов H. parasuis резистентность к энрофлоксацину обнаружена у 2 (7,69 %).
Рис. 1. Чувствительность изолятов P. multocida, A. pleuropneumoniae и H. parasuis к энрофлоксацину
Fig. 1. Susceptibility of P. multocida, A. pleuropneumoniae and H. parasuis isolates to enrofloxacin
Из 28 исследуемых изолятов S. suis резистентность к энрофлоксацину проявили 4 (14,28 %) (рис. 2). В тоже время к ко-тримоксазолу резистентность обнаружена у 15 (53,7 %) изолятов. Необходимо отметить, что у 3 (10,71 %) изолятов стрептококка выявлена резистентность сразу к обоим АБП.
Рис. 2 Чувствительность изолятов Streptococcus suis к энрофлоксацину и ко-тримоксазолу
Fig. 2. Susceptibility of Streptococcus suis isolates to enrofloxacin and co-trimoxazole
Одним из частых проявлений стрептококковой инфекции поросят служит менингит, и одной из целей ретроспективного анализа была оценка чувствительности изолятов S. suis к энрофлоксацину и комбинации «триметоприм-сульфамонометоксин». Данные АБП были выбраны исходя из их фармакологических характеристик: бактерицидное действие в отношении широкого спектра микроорганизмов, быстрое всасывание в кровь и проникновение через ГЭБ.
В связи с этим отдельно оценивали чувствительность изолятов S. suis, выделенных из головного мозга свиней. Из 10 изолятов S. suis, выделенных из головного мозга свиней, резистентность к энрофлоксацину проявили 2 (20 %), а к ко-тримоксазолу ― 5 (50 %) (рис. 3).
Рис. 3 Чувствительность изолятов Streptococcus suis, выделенных из головного мозга свиней к энрофлоксацину и котримоксазолу
Fig. 3. Susceptibility of Streptococcus suis isolated from swine brain tissues to enrofloxacin and co-trimoxazole
Заключение
1. Энрофлоксацин (в частности, препараты под торговой маркой Энроксил®) можно рекомендовать для проведения эмпирической антимикробной терапии пастереллеза и гемофилезного полисерозита свиней.
2. Эффективное использование энрофлоксацина (в частности, препаратов под торговой маркой Энроксил®) для лечения актинобациллезной плевропневмонии и стрептококкоза свинейвозможно только после установления чувствительности возбудителя к данному препарату.
3. Эффективное использование сульфаниламидных препаратов (в частности, препаратов под торговой маркой Трисульфон®) для лечения менингитной, суставной и септической форм стрептококкоза свиней, возбудителем которого является Streptococcus suis, возможно только после установления чувствительности возбудителя к данному препарату.
Конфликт интересов
Компания ООО «КРКА ФАРМА» действует в интересах KRKA d. d. ― производителя лекарственных средств под торговой маркой Энроксил® (энрофлоксацин), Трисульфон® (триметоприм/сульфамонометоксин)
1. Performance standards for antimicrobial disc and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals; approved standard, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) Waine, PA, Third Ed., M31-A3, 2008, Vol. 22, No. 6.
