Vladimir, Vladimir, Russian Federation
A retrospective review of antimicrobial susceptibility testing of 134 bacterial isolates to fluoroquinolones, which are the most common in pigs, 74 isolates of cattle respiratory pathogens, and 101 isolates of causative agents of cattle mastitis isolated at FSBE «ARRIAH». The testing was held on animals from different age groups since 2014 to 2019. The causative agents of respiratory diseases in pigs P. multocida, A. pleuropleumoniae, H. parasuis showed high sensitivity to marbofloxacin, and therefore it can be recommended for the treatment of respiratory infections of pigs. The causative agents of cattle respiratory diseases also demonstrate high susceptibility to marbofloxacin, and can be recommended for the treatment of bacterial infections in cattle.
respiratory diseases, antimicrobial susceptibility, fluoroquinolones, marbofloxacin, cattle, mastitis, complex of respiratory disease, Marfloxin®
Сокращения: АБП ― антибактериальные препараты, ДНК ― дезоксирибонуклеиновая кислота, КОЕ ― колониеобразующие единицы, КРС ― крупный рогатый скот, CLSI ― Clinical and Laboratory Standards Institute (Институт клинических и лабораторных стандартов. Ранее ― National Committee for Clinical Laboratory Standards, NCCLS ― Национальный комитет по клиническим и лабораторным стандартам)
Введение
Динамичное развитие животноводства в России ставит перед ветеринарной наукой ряд задач, связанных с совершенствованием средств специфической профилактики и лечения инфекционных болезней свиней и КРС. Большое значение приобретает этиотропная терапия, и в первую очередь использование антибиотиков, позволяющих значительно снизить ущерб, причиняемый заболеваниями бактериальной этиологии.
Марбофлоксацин относится к антибактериальным препаратам группы фторхинолонов III поколения, разработанный специально для ветеринарии. Препарат обладает широким спектром бактерицидного действия, основанного на подавлении бактериальных ферментов ДНК-гиразы и топоизомеразы IV, участвующих в репликации ДНК микроорганизмов.
Цель исследования
Определить чувствительность изолятов возбудителей респираторных заболеваний свиней и КРС, а также возбудителей мастита КРС, выделенных в хозяйствах Российской Федерации за период 2014‒2019 гг, к марбофлоксацину. Данная информация необходима для разработки и применения научно-обоснованных подходов к лечению животных, сдерживанию появления и распространения антибиотикоустойчивых возбудителей в хозяйствах.
Результаты
Проведен анализ антибиотикочувствительности:
ü 134 изолята/штамма возбудителей респираторных болезней свиней. Из них: Pasteurella multocida ― 32; Haemophillus parasuis ― 30; Actinobacillus pleuropneumoniae ― 37 и Streptococcus suis ― 35;
ü 74 изолята/штамма возбудителей респираторных болезней КРС. Из них: Pasteurella multocida ― 31; Mannheimia haemolytica ― 35 и Haemophilus (Histophilus) somnus (somni) ― 8.
ü 101 изолят возбудителей мастита КРС. Из них: Streptococcus agalactiae ― 48; Streptococcus disgalactiae ― 4, Streptococcus uberis ― 8, Staphylococcus aureus ― 22, Staphylococcus hyicus ― 2, Staphylococcus haemolyticus ― 1, Trueperella (Actinomyces) pyogenes ― 8, Escherichia coli ― 7, Pseudomonas aeruginosa ― 1.
Чувствительность к АБП тестировали диско-диффузионным методом по рекомендациям CLSI (США). В работе использовали диски марбофлоксацина (5 мкг) производства компании BDBBLтм, США.
Чувствительность изолятов/штаммов возбудителей к антибиотику определяли на питательном агаре Мюллера-Хинтон (Himedia); чувствительность изолятов гемофильных бактерий к АБП ― на питательном агаре Мюллера-Хинтон с добавлением сыворотки крови лошади, V-фактора роста (никотинамидадениндинуклеотид). Бактериальные суспензии изолятов/штаммов готовили на фосфатно-буферном солевом растворе из суточных агаровых культур. Оптическая плотность каждого инокулюма перед использованием составляла 0,5 ед. по шкале МакФарланда, что соответствовало концентрации 1,5×108 КОЕ/см3. Посевы с дисками АБП инкубировали в течение 24 ч при температуре (36,5±0,5)оС. Диаметр зоны ингибирования роста культур измеряли с помощью штангенциркуля и выражали в миллиметрах. Категории чувствительности (чувствительный, промежуточный или резистентный) определяли путем сравнения зоны задержки роста каждого изолята с рекомендациями Национального комитета по Клиническим Лабораторным Стандартам [1]. Диаметр зоны задержки роста чувствительных изолятов составляет ≥20 мм, промежуточных ― 15…19 мм, резистентных ― ≤14 мм.
Для оценки воспроизводимости и точности процедуры определения чувствительности к АБП параллельно с испытуемыми изолятами в качестве эталонов использовали коллекционные штаммы.
1. Перечень изолятов/штаммов Pasteurella multocida от свиней
List of isolates/strains of Pasteurella multocida from pigs
№ п/п
Изолят/штамм
Серогруппа
Дата выделения (получения)
Орган выделения
Возраст, сутки
1
Изолят
А
25.08.2009
Легкие
125
2
»
А
13.09.2010
»
65
3
»
D (DNT+)
12.03.2011
Носовые смывы
75
4
»
А
12.03.2011
Легкие
145
5
»
D
04.02.2013
н/у
100
6
»
А
05.10.2014
Легкие
95
7
»
А
05.02.2015
»
60
8
»
А
11.11.2016
»
70
9
»
А
02.04.2016
»
120
10
»
D
30.04.2016
»
65…120
11
»
А
05.06.2016
»
140
12
»
А
28.06.2016
»
120
13
»
А
03.03.2017
»
162
14
»
А
08.03.2017
»
90
15
»
А
25.03.2017
»
235
16
»
А
15.04.2017
»
60
17
»
А
28.05.2017
»
45
18
»
А
11.06.2017
»
60…80
19
»
А
24.09.2017
»
57
20
»
А
24.09.2017
»
160
21
»
А
16.09.2017
»
46
22
»
А
21.09.2017
»
135…138
23
»
А
23.11.2018
»
н/у
24
»
А
21.11.2018
»
120…150
25
»
А
29.11.2018
»
н/у
26
»
А
11.12.2018
»
50…55
27
»
А
17.12.2018
»
60…130
29
»
А
19.03.2019
»
280…870
30
Штамм №1231
А
-
-
-
31
Штамм №9
D
-
-
-
32
Штамм Kobe-6
D
-
-
-
Примечание: н/у ― не указан.
2. Перечень изолятов/штаммов Haemophillus parasuis от свиней
List of isolates/strains of Haemophilus parasuis from pigs
№ п/п
Изолят/штамм
Серотип
Дата выделения (получения)
Орган выделения
Возраст, сутки
1
Изолят
н/о
13.06.2008
Легкие
35
2
»
н/о
18.04.2008
»
48
3
»
5
12.05.2009
»
25…35
4
»
н/о
25.08.2009
»
58…65
5
»
5
02.04.2010
»
30…45
6
»
4
09.03.2011
»
68
8
»
н/о
12.10.2012
»
40…60
9
»
н/о
13.08.2013
»
56
10
»
н/о
15.09.2013
»
38…46
11
»
5
02.03.2014
»
65
12
»
н/о
23.10.2014
»
50…70
13
»
н/о
14.04.2015
»
60…90
14
»
н/о
05.06.2015
»
40…55
15
»
н/о
02.10.2015
»
65
16
»
н/о
08.11.2015
»
48…52
17
»
5
12.03.2016
»
45
18
»
н/о
25.06.2016
»
35…45
19
»
н/о
03.07.2016
»
60…75
20
»
н/о
11.09.2016
»
50
21
»
н/о
03.02.2017
»
35…55
22
»
н/о
18.04.2017
»
65
23
»
н/о
22.12.2017
»
30…45
24
»
5
13.03.2018
Головной мозг
40…80
25
»
н/о
06.06.2018
Легкие
35
26
»
5
11.12.2018
»
50…55
27
Штамм Nagasaki
5
18.06.2015
-
-
28
Штамм SW-124
4
18.06.2015
-
-
29
Штамм №19417
4
20.04.2014
-
-
30
Штамм «Уральский»
5
-
Легкие
45
Примечание: н/о ― не определен.
3. Перечень изолятов/штаммов Actinobacillus pleuropneumoniae от свиней
List of isolates/strains of Actinobacillus pleuropneumoniae from pigs
№
Изолят/штамм
Серотип
Дата выделения (получения)
Орган выделения
Возраст, сутки
1
Изолят
9
25.08.2009
Легкие
125
2
»
2
03.10.2009
»
105
3
»
8
22.04.2009
»
80
4
»
10
18.07.2009
»
75
5
»
10
05.10.2009
»
120
6
»
2
03.04.2010
»
85
7
»
7
11.09.2010
»
148
8
»
8
12.05.2011
»
112
9
»
7
16.04.2013
»
125
10
»
6
16.04.2013
»
70…90
11
»
7
05.04.2014
»
105
12
»
6
04.11.2014
»
69
13
»
9
12.03.2016
Селезенка
35
14
»
5
11.11.2016
Легкие
70
15
»
5
02.04.2016
»
120
16
»
5
15.01.2017
»
140
17
»
2
10.02.2017
»
163
18
»
5
03.03.2017
»
00
19
»
5
25.03.2017
»
80…120
20
»
5
03.03.2017
»
92…127
21
»
2
15.03.2017
»
90…130
22
»
2
07.05.2017
»
100
23
»
н/о
24.04.2018
»
72
24
»
8
06.06.2018
»
105
25
»
5
21.08.2018
»
110
26
»
н/о
21.11.2018
»
120…150
27
»
10
03.12.2018
»
н/у
28
»
2
21.02.2019
»
70…190
29
»
н/о
19.03.2019
»
21…126
30
»
2
25.03.2019
»
н/у
31
»
2
27.03.2019
»
152
32
»
5
08.05.2019
»
30…45
33
»
5
31.05.2019
»
93…109
34
»
н/о
13.08.2019
»
н/у
35
Штамм «Ш-1»
2
03.06.2011
»
110
36
Щтамм №29089
2
18.10.2011
-
-
37
Штамм №33377
5
18.10.2011
-
-
Примечание: н/о – не определен, н/у – не указан
4. Перечень изолятов/штаммов Streptococcus suis от свиней
List of isolates/strains of Streptococcus suis from pigs
№ п/п
Изолят/штамм
Дата выделения (получения)
Орган выделения
Возраст, сутки
1
Изолят
12.06.2013
Сустав
60
2
»
13.08.2013
»
50
3
»
15.03.2014
»
75
4
»
03.11.2014
»
40…50
5
»
10.02.2015
Селезенка
45
6
»
03.04.2015
»
150
7
»
20.05.2015
Сустав
50
8
»
21.05.2015
»
110
9
»
27.11.2015
Головной мозг
50
10
»
27.01.2016
Печень, селезенка
1…2
11
»
15.04.2016
Головной мозг
65
12
»
28.05.2016
Селезенка
20
13
»
18.06.2016
Головной мозг
55
14
»
05.08.2016
» »
30…35
15
»
23.11.2016
» »
63
16
»
18.02.2017
Селезенка
35
17
»
01.03.2017
Головной мозг
60
18
»
15.04.2017
Селезенка
53
19
»
03.05.2017
Сустав
21
20
»
06.05.2107
»
21
21
»
08.05.2107
Селезенка
35
22
»
09.07.2017
Печень, селезенка
42
23
»
02.08.2017
Селезенка
5
24
»
24.04.2017
Сустав
50
25
»
27.04.2017
Головной мозг
50…60
26
»
05.06.2018
» »
10…15
27
»
03.06.2018
» »
34…38
28
»
11.10.2018
» »
30…35
29
»
14.01.2019
» »
н/у
30
»
05.04.2019
» »
н/у
31
»
19.04.2019
» »
н/у
32
»
24.05.2019
» »
н/у
33
»
06.08.2019
» »
25…60
34
Штамм «КА-2»
02.03.2015
» »
55
34
Штамм №43765
03.08.2016
-
-
Примечание: н/у ― не указано
Рис. 1. Чувствительность изолятов P. multocida, H. parasuis, A. pleuropneumoniae и S. suis к марбофлоксацину
Fig. 1. Susceptibility of P. multocida, H. parasuis, A. pleuropneumoniae and S. suis isolates to marbofloxacin
Все 29 исследуемых изолятов P. multocida, 26 изолятов H. parasuis и 34 изолята A. pleuropneumoniae проявили высокую чувствительность к марбофлоксацину. Из 33 исследуемых изолятов S. suis у 7 отмечена слабая чувствительность к препарату. Необходимо отметить, что из 96 протестированных изолятов возбудителей респираторных болезней свиней не выявлено ни одного резистентного.
5 Перечень изолятов Pasteurella multocida от КРС
List of isolates Pasteurella multocida from cattle
№ п/п
Изолят
Дата выделения (получения)
Орган выделения
Возраст, сутки
1
Изолят
10.06.2015
Легкие
н/у
2
»
02.07.2015
»
»
3
»
05.08.2015
»
»
4
»
03.09.2015
»
60
5
»
14.09.2015
»
н/у
6
»
14.10.2015
»
н/у
7
»
28.10.2015
»
30…40
8
»
24.02.2016
»
н/у
9
»
17.05.2016
»
»
10
»
27.06.2016
»
»
11
»
12.08.2016
»
»
12
»
16.09.2016
»
180
13
»
28.10.2016
»
120…180
14
»
13.02.2017
Носовые смывы
6…90
15
»
11.05.2017
Легкие
13…45
16
»
20.06.2017
»
н/у
17
»
06.07.2017
»
»
18
»
10.01.2018
Носовые смывы
30…120
19
»
12.02.2018
Легкие
н/у
20
»
15.02.2018
»
30
21
»
15.02.2018
Носовые смывы
150
22
»
17.08.2018
Легкие
н/у
23
»
30.08.2018
»
60…90
24
»
25.09.2018
Носовые смывы, легкие
90…120
25
»
24.10.2018
Носовые смывы, легкие
н/у
26
»
26.10.2018
Легкие
»
27
»
09.01.2019
»
»
28
»
09.01.2019
»
70…80
29
»
18.07.2019
»
н/у
30
»
18.07.2019
»
»
31
»
16.08.2019
»
»
Примечание: н/у – не указан.
5. Перечень изолятов/штаммов Mannheimia haemolytica от КРС
List of isolates/strains Mannheimia haemolytica from cattlle
№ п/п
Изолят/штамм
Дата выделения (получения)
Орган выделения
Возраст, сутки
1
Изолят
10.11.2014
Легкие
15…30
2
»
19.11.2014
Носовые смывы
н/у
3
»
26.12.2014
Легкие
н/у
4
»
27.03.2015
»
»
5
»
02.06.2015
»
»
6
»
15.06.2015
»
»
7
»
02.07.2015
»
»
8
»
30.07.2015
»
»
9
»
03.09.2015
»
60
10
»
15.09.2015
»
90
11
»
14.09.2015
»
н/у
12
»
09.02.2016
»
60
13
»
29.03.2016
»
16…720
14
»
17.05.2016
»
н/у
15
»
27.06.2016
»
»
16
»
16.09.2016
»
180
17
»
29.09.2016
»
75
18
»
17.01.2017
»
730
19
»
13.02.2017
Носовые смывы
6…90
19
»
21.03.2017
Легкое
90
20
»
28.03.2017
»
365…730
21
»
06.07.2017
»
н/у
22
»
18.10.2017
»
н/у
23
»
10.01.2018
Носовые смывы
30…120
24
»
15.02.2018
Легкие
30
25
»
15.02.2018
Носовые смывы
150
26
»
03.05.2018
Легкие
н/у
27
»
10.08.2018
»
н/у
28
»
30.08.2018
»
60…90
29
»
22.11.2018
Носовые смывы
н/у
30
»
09.01.2019
Легкие
»
31
»
09.01.2019
»
»
32
»
18.01.2019
»
30…45
33
»
18.03.2019
»
н/у
34
»
18.07.2019
»
»
35
Штамм №29696
10.11.2017
-
-
Примечание: н/у – не указан.
7. Перечень изолятов Histophilus somni от КРС
№ п/п
Дата выделения (получения)
Орган выделения
Возраст, сутки
1
10.11.2014
Легкие
15…30
2
17.02.2015
»
н/у
3
28.04.2015
»
90
4
22.06.2015
»
60
5
15.09.2015
»
90
6
16.05.2016
Суставы конечностей
30
7
03.11.2016
Легкое
н/у
8
13.01.2018
Легкое, смывы из носа
» »
Примечание: н/у – не указан
8. Перечень изолятов ― возбудителей мастита КРС
List of isolates - of the causative agents of mastitis in cattle
№ п/п
Дата
Возбудитель
1
24.09.2015
Streptococcus agalactiae
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
2
24.06.2015
Streptococcus agalactiae
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
3
08.07.2015
Streptococcus agalactiae
4
30.07.2015
Staphylococcus aureus
5
21.08.2015
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
6
15.09.2015
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
7
23.10.2015
Streptococcus agalactiae
Escherichia coli
8
24.12.2015
Streptococcus agalactiae
Streptococcus uberis
Escherichia coli
9
26.01.2016
Streptococcus agalactiae
10
03.02.2016
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
11
19.02.2016
Streptococcus agalactiae
12
09.03.2016
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
13
06.04.2016
Staphylococcus aureus
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
14
19.08.2016
Streptococcus agalactiae
15
22.08.2016
Streptococcus uberis
16
10.10.2016
Streptococcus agalactiae
17
20.10.2016
»
18
03.11.2016
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
19
01.11.2016
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
20
03.03.2017
Streptococcus agalactiae
21
14.03.2017
»
22
27.03.2017
»
23
30.03.2017
Staphylococcus aureus
24
11.05.2017
Streptococcus agalactiae
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
25
31.05.2017
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
26
26.07.2017
Streptococcus agalactiae
Pseudomonas aeruginosa
27
01.08.2017
Staphylococcus aureus
28
20.09.2017
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
29
21.09.2017
Streptococcus agalactiae
30
21.09.2017
Streptococcus agalactiae
Escherichia coli
31
14.12.2017
Streptococcus agalactiae
32
17.01.2018
»
33
18.01.2018
Streptococcus agalactiae
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
Escherichia coli
34
23.01.2018
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus hyicus
35
26.01.2018
Staphylococcus hyicus
36
15.02.2018
Streptococcus uberis
37
19.02.2018
Streptococcus agalactiae
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
38
11.04.2018
Streptococcus agalactiae
39
07.05.2018
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
40
31.05.2018
Escherichia coli
41
27.06.2018
Streptococcus agalactiae
42
08.08.2018
»
43
09.08.2018
Streptococcus uberis
44
31.08.2018
Streptococcus disgalactiae
45
31.07.2018
»
46
06.11.2018
Streptococcus agalactiae
47
15.11.2018
»
48
22.11.2018
»
49
18.12.2018
Streptococcus agalactiae
Escherichia coli
50
14.01.2019
Streptococcus agalactiae
51
14.01.2019
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
52
31.01.2019
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
53
19.02.2019
Trueperella (Actinomyces) pyogenes
54
26.02.2019
Streptococcus agalactiae
55
27.02.2019
»
56
28.02.2019
Streptococcus agalactiae
Streptococcus uberis
Staphylococcus haemolyticus
57
18.03.2019
Streptococcus disgalactiae
58
03.04.2019
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
59
16.04.2019
Streptococcus disgalactiae
60
26.04.2019
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
61
15.05.2019
Streptococcus uberis
Staphylococcus aureus
62
12.07.2019
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
63
23.07.2019
Streptococcus uberis
64
14.08.2019
Staphylococcus aureus
65
28.08.2019
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
66
28.08.2019
Streptococcus agalactiae
Streptococcus uberis
Staphylococcus aureus
67
29.08.2019
Staphylococcus aureus
68
05.09.2019
Streptococcus agalactiae
Рис. 2. Чувствительность изолятов Streptococcus agalactiae и Staphylococcus aureus к марбофлоксацину
Fig. 2. Susceptibility of Streptococcus agalactiae and Staphylococcus aureus isolates to marbofloxacin
Из 48 исследуемых изолятов Streptococcus agalactiae промежуточную чувствительность к марбофлоксацину проявили 6 (12,5 %), а резистентность ― 2 (4,1 %). Остальные 40 изолятов (83,4 %) показали высокую чувствительность к препарату. Из 22 изолятов Staphylococcus aureus промежуточную чувствительность к антибиотику проявили 4 (18,8 %), при этом резистентных не обнаружено.
Все 4 исследуемых изолята Streptococcus disgalactiae, 8 изолятов Streptococcus uberis, 8 изолятов Trueperella (Actinomyces) pyogenes, 2 изолята Staphylococcus hyicus, 1 изолят Staphylococcus haemolyticus и 1 изолят Pseudomonas aeruginosa проявили высокую чувствительность к марбофлоксацину. Из 7 исследуемых изолятов Escherichia coli ― два проявили промежуточную чувствительность и один проявил резистентность.
Выводы
1. Марбофлоксацин (в частности, препарат под торговой маркой Марфлоксин®) высокоэффективен в отношении возбудителей респираторных заболеваний свиней (Pasteurella multocida, Haemophilus parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae и Streptococcus suis).
2. Марбофлоксацин (в частности, препарат под торговой маркой Марфлоксин®) высокоэффективен в отношении возбудителей респираторных заболеваний КРС (Pasteurella multocida, Mannheimia haemolytica и Histophilus somni).
3. Марбофлоксацин (в частности, препарат под торговой маркой Марфлоксин®) эффективен в отношении возбудителей мастита КРС (Streptococcus agalactiae, Streptococcus disgalactiae, Streptococcus uberis, Staphylococcus aureus, Trueperella (Actinomyces) pyogenes, Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa).
Конфликт интересов
Компания ООО «КРКА ФАРМА» действует в интересах KRKA d. d. ― производителя лекарственного средства под торговой маркой Марфлоксин® (марбофлоксацин).
1. National Committee for Clinical Laboratory Standards, May 2004, M31-S1. Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals. Information Supplement. NCCLS, Wayne, PA.
